UNA REVISIÓN SOBRE EL USO DEL ACEITE ESENCIAL DE ORÉGANO

(Origanum Vulgare) CONTRA Listeria Monocytogenes Y SU IMPLICACIÓN EN LA

SEGURIDAD ALIMENTARIA PARA PRODUCTOS CARNICOS Y LACTEOS.

MARIA FERNANDA SILGADO OLIVERO

JUAN MANUEL GONZALEZ AGUILAR

CORPORACIÓN TECNOLÓGICA DE BOGOTÁ (CTB )

TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA

BOGOTÁ DC.

NOVIEMBRE, 2024

UNA REVISIÓN SOBRE EL USO DEL ACEITE ESENCIAL DE ORÉGANO

(Origanum Vulgare) CONTRA Listeria Monocytogenes Y SU IMPLICACIÓN EN LA

SEGURIDAD ALIMENTARIA PARA PRODUCTOS CARNICOS Y LACTEOS.

JUAN MANUEL GONZALEZ AGUILAR

C.C 1000494152

MARIA FERNANDA SILGADO OLIVERO

C.C 1193567972

MONOGRAFÍA PARA OPTAR POR EL TÍTULO A

TECNÓLOGO EN REGENCIA DE FARMACIA

DIRECTOR

OSCAR DAVID YEPEZ RENDON

MSc EN QUÍMICA

CORPORACIÓN TECNOLÓGICA DE BOGOTÁ (CTB )

TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA

BOGOTÁ DC.

NOVIEMBRE, 2024

ÍNDICE

RESUMEN...................................................................................................................5 ABSTRACT.................................................................................................................6 1° INTRODUCCIÓN.................................................................................................... 7 2° PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA..................................................................10 3° JUSTIFICACIÓN...................................................................................................12 4° OBJETIVOS..........................................................................................................14 Objetivo General.................................................................................................. 14 Objetivo Específico...............................................................................................14 5° ANTECEDENTES.................................................................................................15 5.1 Origanum Vulgare.......................................................................................... 15 Vitalini y Iriti (2017) en su investigación que lleva como título “Bioactividades de Origanum vulgare L: una actualización” tiene como objetivo dar una breve explicación sobre la morfología del oregano, su crecimiento y taxonomía dando las siguiente explicación.......................................................................................15 5.2 Métodos de Extracción y Composición Química............................................16 5.3 Efecto antimicrobiano del Aceite de orégano.................................................19 6° MARCO REFERENCIAL...................................................................................... 22 6.1 Marco teórico.......................................................................................................23 6.1.1 Origanum Vulgare....................................................................................... 23 6.1.2 Aceites esenciales ( AE)............................................................................. 24 6.1.3 Metabolitos secundarios del orégano..........................................................25 6.1.4 Propiedades Antimicrobianas del AE de orégano.......................................27 6.1.5 Listeria Monocytogenes.............................................................................. 28 6.1.6 Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA)...................................... 29 6.2 Marco Conceptual................................................................................................30 6.3 Marco Legal........................................................................................................33

7°METODOLOGÍA.................................................................................................... 36 8° DESARROLLO DEL TEMA..................................................................................38

8.1

ACEITE ESENCIAL DE ORÉGANO (Caracterización del aceite esencial de orégano)TABLA Caracterización de oregano.......................................................47

8.2 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA (Determinar el uso potencial del aceite

esencial de orégano (Origanum vulgare) contra Listeria monocytogenes mediante la revisión de estudios in vitro)............................................................. 48

8.3 SEGURIDAD ALIMENTARIA (relación de la actividad antimicrobiana con la

mejora de la seguridad alimentaria).....................................................................51 CONCLUSIONES......................................................................................................53 Bibliografía...............................................................................................................54 REFERENCIAS....................................................................................................68

RESUMEN

El presente trabajo se llevó a cabo mediante una búsqueda bibliográfica sistemática, con el objetivo de describir las propiedades del aceite esencial de orégano (Origanum vulgare), centrándose en su acción antimicrobiana. Este tema ha despertado un creciente interés debido al uso de antimicrobianos de origen natural en la industria alimentaria, específicamente en respuesta a los desafíos de seguridad alimentaria asociados con patógenos como es el caso de la bacteria Listeria monocytogenes.

Este microorganismo, causante de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA), representa un riesgo significativo para ciertos grupos vulnerables de la población .

En este contexto, el estudio indaga el potencial del aceite esencial de orégano como coadyuvante en la mejora de la seguridad alimentaria.Entre los componentes más importantes del aceite esencial de orégano se encuentran el carvacrol y el timol, que son metabolitos secundarios presentes en mayor concentración y se les atribuye una notable actividad fitoterapéutica. Por lo tanto, en los estudios evaluados en esta revisión se determina la concentración mínima inhibitoria (CMI) del aceite frente a Listeria monocytogenes, con el fin de afirmar su capacidad antimicrobiana. El propósito de esta revisión es ofrecer una visión integral sobre posibles soluciones para el control de enfermedades microbianas, basada en un análisis exhaustivo de artículos científicos. Para ello, se consultaron bases de datos como Springer Journal, SciELO, Scopus, PubMed, ScienceDirect, Google Académico y revistas especializadas en el tratamiento de enfermedades con fitoterapéuticos. Palabras clave:

Metabolitos secundarios, aceite de orégano, inhibición, enfermedades microbianas, antimicrobiano, monoterpenos, sesquiterpenos,listeria monocytogenes

ABSTRACT

The present work was carried out through a systematic literature search, with the objective of describing the properties of oregano (Origanum vulgare) essential oil, focusing on its antimicrobial action. This topic has attracted increasing interest due to the use of naturally occurring antimicrobials in the food industry, specifically in response to food safety challenges associated with pathogens such as Listeria monocytogenes bacteria. This microorganism, which causes foodborne diseases (ETA), represents a significant risk for certain vulnerable groups of the population. In this context, the study investigates the potential of oregano essential oil as an adjuvant in the improvement of food safety.among the most important components of oregano essential oil are carvacrol and thymol, which are secondary metabolites present in higher concentration and are attributed a remarkable phytotherapeutic activity. Therefore, in the studies evaluated in this review, the minimum inhibitory concentration (MIC) of the oil against Listeria monocytogenes is determined in order to affirm its antimicrobial capacity.

The purpose of this review is to offer a comprehensive view on possible solutions for the control of microbial diseases, based on an exhaustive analysis of scientific articles. For this purpose, databases such as Springer Journal, SciELO, Scopus, PubMed, ScienceDirect, Google Scholar and journals specialized in the treatment of diseases with phytotherapeutics were consulted.

Keywords: Secondary metabolites, oregano oil, inhibition, microbial diseases, antimicrobial, monoterpenes, sesquiterpenes, Listeria monocytogenes

1° INTRODUCCIÓN

El orégano (Origanum Vulgare), pertenece a la familia de Lamiaceae del reino plantae, esta especie puede alcanzar hasta un metro de altura, producen flores que varían su color de blanco a púrpura. Este orégano es una de las especies aromáticas más conocidas, con una fuerte historial tradicional como especia y planta medicinal, pero también como una fuente bien establecida de valiosos medicamentos de origen vegetal en la fitoterapia moderna. La familia Lamiaceae es originaria de Europa, el norte del continente africano y la mayor parte de Asia templada, pero el punto crítico de su diversidad se sitúa en la región mediterránea y predominantemente en Turquía. (Lombrea, 2020). Es una planta la cual se caracteriza por tener una base leñosa y tallos herbáceos. En cuanto a los países del trópico en donde crece esta especie, como Colombia y México se destacan por su producción debido a su gran biodiversidad y clima.

El estudio de esta especie ha tenido una gran importancia durante los últimos años ya que aparte de utilizarse como agente aromático en algunas preparaciones culinarias, también se han venido revisando aplicaciones del aceite de orégano,como agente antimicrobiano.

Numerosos artículos han puesto en evidencia los distintos componentes que puede llegar a tener este aceite esencial, formados por terpenos, monoterpenos y sesquiterpenos (hidrocarburos, alcoholes, cetonas, que pueden ser acíclicos, monocíclicos, bicíclicos y tricíclicos), sustancias azufradas y nitrogenadas.(Acevedo et al., 2007). El timol y el carvacrol son monoterpenos que se encuentran en mayor proporción en el aceite esencial del orégano y son los metabolitos secundarios que tiene acción fitoterapéutica a los cuales se les atribuye su accion antimicrobiana y antioxidante. El mecanismo antimicrobiano del carvacrol puede ser inducido por la producción de especies reactivas de oxígeno, aumentando la permeabilidad de la membrana, además de provocar anomalías de la ultraestructura y pérdida de contenidos intracelulares.(Pei et al., 2020). El timol puede inhibir la actividad de los patógenos al alterar la integridad y función de la membrana celular debido a su hidrofobicidad, provocando una fuga de los componentes intracelulares y provocando la muerte celular ( Kong et al., 2021).

En los últimos años, hemos visto un aumento significativo en las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA), atribuible en gran medida a la contaminación por agentes químicos, físicos o patógenos infecciosos. Entre estos, los patógenos infecciosos son especialmente preocupantes, ya que pueden causar tasas elevadas de mortalidad en la población. Las condiciones del medio ambiente y las prácticas de cultivo y almacenamiento de alimentos juegan un papel crucial en este problema. La contaminación puede fomentar el crecimiento y la proliferación de patógenos, lo que incrementa el riesgo de enfermedades graves e incluso mortales. Por lo tanto, es esencial prestar atención a estos factores para garantizar la seguridad alimentaria y proteger la salud pública. (FDA,2018). La Listeria monocytogenes es un patógeno gram positivo facultativo,perteneciente a la familia de Listeriaceae, es un microorganismo psicrótrofo que crece en un amplio rango de temperatura (0 –

45 °C) con un crecimiento óptimo a 37 °C, es relativamente resistente a altas

concentraciones de sal y puede mantener el crecimiento en una amplia gama de condiciones de pH entre 4.6 y 9.2, puede sobrevivir a métodos de conservación como la congelación y el secado.(Instituto Nacional de Salud-Boletín Epidemiológico Semanal). Este microorganismo se puede transmitir por alimentos contaminados frescos, germinados,cárnicos y pastas, dando lugar a enfermedades como la listeriosis, en donde se estima que 1600 personas se enferman con una infección por Listeria cada año y que aproximadamente 260 mueren por la enfermedad. (Centros para el Control y la Prevención de enfermedades (CDC), 2017). En estados unidos se presentaron cuatro brotes de listeriosis los cuales fueron relacionados con el consumo de quesos contaminados.También se han reportado brotes en: Chile 2008, Francia 1997, Suiza en 1987, Dinamarca 1989-1990, Suecia 2001, Japón 2001, Suiza, Republica checa 2006, Alemania 2007, Noruega 2007, Australia 2013; en la gran mayoría de estos brotes ha estado implicado el queso fresco. Según lo reportado en la base de datos de SIVIGILA se han presentado los siguientes brotes: en el 2017, 2 (1 en Nariño por queso fresco), en el 2018, 4 brotes de los cuales en uno estuvo implicado el queso fresco, en el 2019, 3 (uno por queso en Antioquia, uno en arroz chino en Nariño y uno por mortadela en Medellín. (Instituto Nacional de Salud-Boletín Epidemiológico Semanal).

De acuerdo a lo anteriormente mencionado, en los últimos años se han venido generando estrategias para prevenir la contaminación por parte de L.monocytogenes. Según la OMS es necesario el control en todas las fases de la cadena alimentaria, y la prevención de la multiplicación de la bacteria en el producto alimentario final requiere un enfoque integral. Este control plantea problemas considerables, dada la ubicuidad de la bacteria, su gran resistencia a los métodos de conservación habituales, como la sal, el humo o la acidez, y su capacidad de sobrevivir y crecer a temperaturas de refrigeración. (Organización Mundial de la Salud, 2018). Es por esto que numerosas investigaciones han planteado el uso de especies vegetales como agentes bactericidas o bacteriostáticas, atribuyendo esta capacidad a metabolitos secundarios presentes en estas especies, especialmente a la presencia de compuestos fenólicos como los terpenos y monoterpenos que al interactuar con la membrana de las células pueden llegar a causar daños irreversibles que conducen a la lisis celular. (International Journal of Food Microbiology, 2003, 223-253) En los últimos años, se ha incrementado la incidencia de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA), principalmente debido a la contaminación por patógenos. Entre estos, la Listeria monocytogenes destaca por su capacidad para resistir diversas condiciones ambientales, lo que le confiere resistencia a conservantes y agentes antimicrobianos. En este contexto, el aceite de orégano se presenta como una alternativa prometedora para inhibir el crecimiento de este patógeno.

2° PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) y la seguridad alimentaria constituyen un foco importante entre los problemas sanitarios de la población y generan gran impacto sobre la salud mundial. Según los datos de la Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura (FAO) y la Organización Mundial de la Salud (OMS), se estima que la región latinoamericana experimentó, al menos, 6.000 brotes de diversos tipos de enfermedades de origen alimentario entre 1993 y 2002. los cuales, junto con un número mayor de casos aislados de enfermedades provocadas por los alimentos o agua, causaron en la región unas 57.000 muertes en 2004. (Muñoz et al., 2013) Según un informe entregado por el invima y el Ministerio de Salud y Protección Social titulado “Vigilancia por Laboratorio de Patógenos Bacterianos Asociados a Enfermedad Transmitida por Alimentos-ETA, 2017-2022”, evidencia que los productos carnicos y lacteos son los de mayor consumo en Colombia a los cuales se le relaciona una elevada contaminación microbiana,especialmente por bacterias como E. coli,staphylococcus,salmonella spp,P. aeruginosa,L. monocytogenes. Esta última bacteria presentó una prevalencia en los muestreos durante el año 2017 hasta el 2022 en productos cárnicos del 7,3 % y en lácteos del 2,2 % . (Díaz, 2023) Listeria monocytogenes, una bacteria gram positiva, es particularmente preocupante debido a su capacidad para sobrevivir en condiciones ambientales adversas y formar biopelículas en superficies, lo que dificulta su eliminación en la industria alimentaria. Además, esta bacteria puede sobrevivir a temperaturas de refrigeración y a procesos térmicos inadecuados (Muñoz et al., 2013).

A pesar de que existen controles durante el procesamiento y fabricación de estos alimentos listos para el consumo humano,como por ejemplo del uso de elementos de protección personal, control de temperaturas, higiene y saneamiento, pruebas microbiológicas y controles de calidad,existe la posibilidad de que alguna cepa de Listeria monocytogenes pueda eludir estos pasos y causar graves problemas de salud. La complejidad de garantizar la completa inocuidad de los alimentos, junto

con las características particulares de Listeria, como su capacidad para crecer a temperaturas de refrigeración, subraya la importancia de encontrar nuevas alternativas que permitan mejorar la seguridad de estos alimentos. Para enfrentar este problema es crucial generar nuevas investigaciones sobre posibles componentes antimicrobianos que puedan mejorar la seguridad alimentaria. El aceite esencial de orégano (Origanum vulgare) ha emergido como una alternativa prometedora debido a sus reconocidas propiedades antimicrobianas. Este aceite esencial contiene compuestos activos como el carvacrol y el timol, los cuales han demostrado tener un potente efecto bactericida y bacteriostático en diversos estudios. De acuerdo con lo mencionado anteriormente surge la necesidad de realizar una revisión detallada sobre el aceite esencial de orégano como posible agente antimicrobiano frente a la Listeria monocytogenes y la importancia que puede llegar a tener sobre la seguridad alimentaria. De esta manera se plantea la siguiente pregunta. ¿Qué evidencia existe sobre el uso potencial del aceite esencial del orégano (Origanum vulgare) como agente antimicrobiano contra Listeria monocytogenes y sus implicaciones en seguridad alimentaria para productos cárnicos y lácteos?

3° JUSTIFICACIÓN

Colombia es uno de los países que tiene una gran biodiversidad debido a su ecosistema y clima, por ende, una gran variedad de alimentos y plantas se producen anualmente, de acuerdo con esto es necesario garantizar la inocuidad de los alimentos, desde el procesamiento primario hasta la distribución a los mercados mayoristas y minoristas, de esta manera aseguramos la seguridad de la cadena alimentaria y prevenimos posibles enfermedades trasmitidas por alimentos (ETA). Las enfermedades transmitidas por alimentos se producen por la ingestión de alimentos y bebidas contaminadas por microorganismos patógenos que afectan la salud del consumidor en forma individual o colectiva. Sus síntomas más comunes son diarreas y vómitos, pero también se pueden presentar otros como choque séptico, hepatitis y cefaleas. Las ETA constituyen un importante problema de salud pública debido al incremento en su ocurrencia, el surgimiento de nuevas formas de transmisión, la aparición de grupos poblacionales vulnerables, el aumento de la resistencia de los patógenos a los compuestos antimicrobianos y el impacto socioeconómico que ocasionan. La incidencia de estas enfermedades es un indicador directo de la calidad higiénico-sanitaria de los alimentos. (INVIMA, 2019). Según un informe presentado por el Instituto Nacional de Salud(INS), sobre enfermedades transmitidas por alimentos, las carnes y productos cárnicos al igual que las mezclas de arroz y el queso, son los alimentos implicados en mayor proporción en los brotes de enfermedades transmitidas por microorganismos. Dentro de estos la Listeria presenta una baja prevalencia y pocos casos sobre personas infectadas con este patógeno.(Instituto Nacional de Salud, 2019). La Listeria monocytogenes presenta una crucial importancia en el sector alimentario ya que presenta resistencia a destinos ambientes; puede sobrevivir semanas a meses en hierba, arena, tierra, leches y otros productos. La resistencia al calor ha sido estudiada a raíz de un brote de listeriosis ocurrido en Estados Unidos por el consumo de leche pasteurizada, lo cual representa un desafío constante para la industria alimentaria. A pesar de las medidas de control implementadas como el

mantenimiento de temperaturas adecuadas y prácticas estrictas de higiene, la completa eliminación de esta bacteria sigue siendo problemática. Es por ello, que diferentes investigaciones han apuntado a la búsqueda de compuestos naturales con propiedad antimicrobiana que pueda ser frente a los microorganismos tanto en el sector alimentario como en la línea farmacéutica.

Por otro lado un estudio realizado por Alba Lucia Corredor arrojaron como resultado que el Origanum vulgare demostró tener un efecto antimicrobiano favorable frente al crecimiento de Listeria monocytogenes, esto se debe a que el carvacrol y el timol influyen en gran medida en la actividad antimicrobiana, debido que estos compuestos fenólicos afectan directamente la composición de la membrana celular, provocando alteraciones en los procesos de transporte de iones potasio modificando la permeabilidad de la misma llegando a causar lisis celular. La revisión de distintos artículos de investigación permitió direccionar esta monografía sobre eficacia que puede llegar a tener el aceite esencial de orégano frente a la Listeria monocytogenes, al sintetizar hallazgos presentados por distintos autores, permite conocer la caracterización sobre el orégano, la composición del aceite esencial, la extracción con mejores resultados y su uso como agente antimicrobiano en la mejora de la seguridad alimentaria.

Por último cabe aclarar que la justificación de esta revisión se base en la necesidad de recopilar de manera exhaustiva la literatura disponible acerca del aceite de orégano (Origanum vulgare) y dar una visión más clara sobre su potencial uso en la industria alimentaria como herramienta antimicrobiana, contribuyendo de esta manera a futuras investigaciones sobre el tema.

4° OBJETIVOS

Objetivo General Verificar por medio de una revisión bibliográfica el potencial efecto antimicrobiano del aceite esencial de orégano (Origanum Vulgare) contra Listeria Monocytogenes y su implicación en seguridad alimentaria para productos cárnicos y lácteos. Objetivo Específico ● Caracterizar el aceite esencial de orégano (Origanum Vulgare) en cuanto a su composición química y métodos de extracción. ● Determinar el uso potencial del aceite esencial de orégano (Origanum vulgare) contra Listeria monocytogenes mediante la revisión de estudios in vitro.

● Establecer una relación entre la actividad antimicrobiana del aceite esencial de orégano y la seguridad alimentaria para productos cárnicos y lácteos.

5° ANTECEDENTES

Los presentes antecedentes abordan el aceite esencial de orégano (Origanum vulgare) de manera estructurada y descendente. En primera instancia, se examinará la importancia del orégano como especie, considerando su relevancia en la industria y su taxonomía. Por consiguiente, se discutirá una variedad de investigaciones que exploran los métodos de extracción del aceite de orégano, su composición química y sus características fitoquímicas y por último se analizará el efecto antimicrobiano del aceite de orégano sobre distintos microorganismos y su importancia como posible mejora frente a la seguridad alimentaria Para la elaboración de estos antecedentes se consultaron artículos científicos, revistas especializadas y repositorios de bases de datos para obtener información exhaustiva y actualizada sobre el tema.

5.1 Origanum Vulgare

Vitalini y Iriti (2017) en su investigación que lleva como título “Bioactividades de Origanum vulgare L: una actualización” tiene como objetivo dar una breve explicación sobre la morfología del oregano, su crecimiento y taxonomía dando las siguiente explicación.

El Origanum vulgare L. (Lamiaceae), originaria de la región mediterránea y de Eurasia occidental, es una hierba aromática perenne, de 30 a 50 cm de altura, de flores blancas o moradas, con hojas opuestas, lanceoladas y dentadas.El O.

vulgare es reconocida en todo el mundo como hierba aromatizante. También se utiliza en la medicina tradicional por sus efectos sobre la salud, principalmente contra los trastornos bronquiales, como digestivo y antiséptico, para tratar resfriados, indigestiones y malestares estomacales. Las partes aéreas contienen una amplia gama de componentes medicinalmente activos, incluidos glucósidos fenólicos, flavonoides, taninos, esteroles y altas cantidades de terpenos.(Vitalini, Irit,

2017).

Moncada, J., Tamayo, J. A., & Cardona, C. A. (2016). En su investigación habla sobre la evaluación técnico-económica y ambiental de la extracción de aceite esencial de orégano (Origanum vulgare) y Romero (Rosmarinus officinalis) en Colombia, poniendo en evidencia los costos de producción del orégano utilizando tecnología de destilación de agua con rendimientos de extracción de 8,14 kg / tonelada y 8,43 kg / tonelada para orégano y romero, respectivamente. (Moncada et al., 2016, 172-181) García Pérez et al, en su ensayo que lleva como título “Revisión de la producción, composición fitoquímica y propiedades nutracéuticas del orégano mexicano” nos da una visión sobre la especie Origanum Vulgare en cuanto a su distribución mundial además de presentar un análisis de las estrategias de propagación, composición química y propiedades nutracéuticas del orégano. En donde los fitoquímicos presentes pueden clasificarse en tres categorías: compuestos volátiles, lípidos y fenólicos.

Estos componentes presentan diversas propiedades nutracéuticas entre las que destacan la actividad antioxidante, hipoglucémica, hipotensiva, hipolipidémica y anticancerígena. Los avances en el estudio de la composición fitoquímica y su relación con nuevas propiedades nutracéuticas hacen del orégano un producto de alto valor comercial con amplias aplicaciones quimioterapéuticas. (Garcia Perez et al., 2012)

5.2 Métodos de Extracción y Composición Química

Acevedo, D, Navarro, M, y Monroy, L (2013). Composición química del aceite esencial de hojas de orégano (Origanum vulgare). Esta investigación se centra en la composición química del orégano, las hojas del orégano fueron recogidas de parcelas artesanales ubicadas en el municipio de Colosó Departamento de Sucre Colombia. El material fue recolectado de forma manual y su identificación se realizó en el herbario de carsucre.

Para la extracción del aceite de se utilizó hidrodestilación con trampa de Clevenger, el procedimiento consistió en picar finamente 1000 gr de material fresco de hojas de

O. vulgare, depositarlo en un recipiente de acero inoxidable, al que se le añadieron 2000 ml de agua destilada, con un tiempo de extracción de 120-180 minutos. Posteriormente al realizar la extracción del aceite de orégano , se procedió a realizar la identificación química de las especies por medio de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas(CG-EM). En este se dieron las especificaciones para el análisis por CG-MS en donde se especificó el volumen de inyección en el cromatógrafo , columna, gas de arrastre , temperatura y otros aspectos.

El estudio mostró como resultado los principales componentes químicos presentes en el orégano de los cuales destacó el Timol (67.51%) como mayoritario, seguido por p-Cimeno, γ-Terpineno, cariofileno,oxido de cariofileno, trans-α-Bergamoteno, Eugenol, y α- Bergamoteno,con 11,66%, 5,51%, 5,38%, 2,22%, 1,65%, 1,49%, y 1,32% respectivamente, que representan más del 80% del total registrado. (Acevedo et al., 2013) Baranauskaite y Jaksˇtasb en su artículo que lleva como título Optimization of carvacrol, rosmarinic, oleanolic and ursolic acid extraction from oregano herbs (Origanum onites L., Origanum vulgare spp. hirtum and Origanum vulgare L.), se centran en realizar una mejor optimización en la extracción de carvacrol, ácido rosmarínico oleanólico y ursólico a partir de diferentes especies (origanum vulgare spp,hirtum, origanum vulgare L y origanum onites). Se utilizaron varios métodos de extracción (asistido por ultrasonido, reflujo de calor, agitación continua, maceración, percolación) y condiciones de extracción (diferentes disolventes, relación material:disolvente, temperatura de extracción, tiempo de extracción) las sustancias activas que se obtuvieron se determinaron por HPLC. La mayor extracción se obtuvo por la técnica de reflujo asistida por calor y en la determinación se obtuvo que el origanum vulgare tuvo una mejor extracción por la técnica mencionada anteriormente.

Este ensayo nos permite determinar la especie de orégano con mayor concentración de metabolitos de carvacrol, el cual es nuestro metabolito de interés y una idea del método de extracción con el que se obtuvo mayor rendimiento. (Jakštas ,Ivanauskas, 2015) Jnaid y Yacoub, en su investigación que lleva como título “Antioxidant and antimicrobial activities of Origanum vulgare essential oil”, tiene como objetivo presentar los metabolitos secundarios presente en el origanum vulgare procedente Latakia y Siria al cual se le realizó un pretratamiento de lavado, secado a temperatura ambiente y triturado para convertirlo en polvo. La hidrodestilación se desarrolló con 100g de polvo seco durante 3 horas. El aceite se secó en sulfato sódico anhidro y se almacenó en vidrio ámbar a 4°C hasta su respectivo análisis por cromatografía.

Por otro lado se comprobó la propiedad antioxidante del orégano a través de la prueba de DPPH a diferentes concentraciones del orégano.Frente ante la actividad antimicrobiana y anti fungicida se estudiaron cinco cepas (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Candida albicans). Se realizó mediante el método de microdilución en caldo y se utilizó la solución madre de aceite esencial diluida con tween 80 para hallar la mínima cantidad inhibitoria. Las bacterias se incubaron a 37ºC durante 24 h, mientras que los hongos se incubaron a 28ºC durante 48 h. (Jnaid, Y Yacoub, R., 2016). Hashemi y Nikmaram realizaron una hidrodestilación asistida por voltaje y hicieron una comparación con la hidrodestilación convencional , evidenciando una mejoría por hidrodestilación asistida por voltaje ya que se redujo el tiempo de extracción.Para la actividad antimicrobiana, los valores de concentración media inhibitoria ( CIM) , indicaron actividades inhibidoras más altas contra S. aureus y B. cereus (con valores de CIM similares de 6,25 μg/mL) que P. aeruginosa (25 μg/mL). Sin embargo, no se observó ninguna influencia significativa entre los diferentes voltajes aplicados y los dos métodos de extracción.(Hashemi,

SMB,

Nikmaram,2017)

Arcila-Lozano, Cynthia Cristina, et al. "El orégano: propiedades, composición y actividad biológica de sus componentes." donde hacen una breve recopilación de el Origanum Vulgare y sus componentes principales de los cuales se encuentran el limoneno, el b -cariofileno, el r -cimeno, el canfor, el linalol, el a -pineno, el carvacrol y el timol. En el género Lippia pueden encontrarse estos mismos compuestos. Su contenido depende de la especie, el clima, la altitud, la época de recolección y el estado de crecimiento. (Arcila Lozano et al., 2004) En este estudio presentado por Téllez Monzón y Nolazco Cama. Realizaron la extracción del aceite esencial esencial de orégano (Origanum vulgare spp.)

cultivado en la ciudad de Tacna (Perú). El análisis físico químico determinó las siguientes características: color (L* 60,51, a* –2,83, b* 14,31), índice de refracción de 1,475; densidad específica de 0,9132, y solubilidad en alcohol de 75 ml. Asimismo, la composición química se evaluó mediante cromatografía de gases, acoplada a espectrometría de masas. El cromatograma mostró los siguientes porcentajes: l-4 terpineol, 26,56; timol, 18,80; g-terpineno, 11,77; 2-careno, 6,53; terpineol, 4,08; m-cimeno, 3,27; y carvacrol, 2,24, entre otros presentes en menor proporción. (Tellez Monzón & Nolazco Cama, 2017)

5.3 Efecto antimicrobiano del Aceite de orégano

En el artículo publicado por Grande, Lesly, et al, que lleva como título “Efecto antimicrobiano del aceite esencial de orégano (Origanum vulgare) frente a Staphylococcus aureus en carne de pollo” . En esta revisión se comprueba la inhibición del aceite de orégano frente a staphylococcus aureus en carne de pollo, buscando la concentración mínima inhibitoria según diluciones seriadas y la concentración mínima bactericida para determinar la supervivencia de las bacterias expuestas a diferentes concentraciones del aceite esencial. Los resultados evidencian un efecto antimicrobiano del AO frente a S. aureus en carne de pollo. Esta actividad antimicrobiana se debe principalmente al carvacrol y timol del orégano, ya que tienen la capacidad de alterar la permeabilidad de la membrana celular bacteriana, produciendo daño estructural y funcional (Lambert et al., 2001; Burt,2004; Govaris et al., 2010). Asimismo, se ha descrito que el carvacrol puede

alterar la estructura del ADN del S. aureus, afectando con ello la replicación, transcripción y traducción del ADN (Cui et al., 2019). Además, el AO puede causar en S. aureus la inhibición del ciclo del ácido tricarboxílico y sus enzimas clave (Cui et al., 2019). Carhuallanqui et al. (2020) determinaron que el orégano del que se extrajo el AO utilizado en este estudio presentaba 11.9 y 1.7% de timol y carvacrol, respectivamente.

En este estudio reciente que lleva como título “Antioxidant and antimicrobial effect of sodium alginate nanoemulsion coating enriched with oregano essential oil (Origanum vulgare L.) and Trachyspermum ammi oil (Carum cupticum) on food pathogenic bacteria “. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antioxidante y antibacteriana del alginato de sodio recubrimiento en nanoemulsion incorporada con el aceite de orégano (origanum vulgare L.) y el aceite de Trachyspermum ammi (Carum cupticum) sobre la Escherichia coli (ATCC 35218) y Listeria monocytogenes ATCC 19111 para evaluaron en carne de pollo fresca. Saffarian et al. (2024) La nano emulsión entre los dos aceites mencionados anteriormente demuestra un efecto sinérgico lo cual mejora la biodisponibilidad y eficacia de los componentes de los aceites esenciales y él potenciales antimicrobiano por las actividades inhibidoras y bacteriostáticas. En este estudio también evaluaron las propiedades fitoquímicas de este aceite, para saber los metabolitos secundarios responsables de los efectos antimicrobianos.Saffarian et al. (2024) En este estudio se evaluó el aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano) contra cepas de Klebisiella pneumoniae, así como el efecto de su asociación con antimicrobianos sintéticos. Midiendo de esta manera la Concentración Mínima Inhibitoria

(CIM)

y Concentración Mínima Bactericida

(CBM)

en placas de microdilución.Se demostró que aceite esencial de orégano tiene actividad antimicrobiana y bactericida, con una CMI que varía entre 128 μg/mL y 256 μg/mL y una MBC entre 256 μg/mL y 512 μg/mL, frente a las cepas de K. pneumoniae probadas. Cuando se usa en asociación con ampicilina y gentamicina, el aceite esencial de orégano demostró un efecto sinérgico para algunas cepas. Por tanto, se

observa que el aceite esencial probado puede actuar como un antibacteriano prometedor en el tratamiento de enfermedades causadas por K. pneumoniae . (Silva et al., 2023, 10) Walasek-Janusz, Magdalena, et al, realizaron la comparación de 4 aceites de orégano provenientes de Polonia, Europa, Turquía y Estados Unidos con el fin de analizar la composición química y las actividades antimicrobianas y antioxidantes. A la hora de evaluar su actividad antimicrobiana lo hicieron con 23 cepas, incluidas bacterias Gram positivas, bacterias Gram negativas y especies de Candida. Obteniendo como resultado por un lado que el componente principal de los AE analizados fue el carvacrol (76,64–85,70%). La mayor cantidad de este compuesto se determinó en el AEO polaco. Los AEO que analizaron mostraron resistencia antimicrobiana, que fue especialmente fuerte contra los hongos. (Walasek, 2024)

6° MARCO REFERENCIAL

El orégano es una especie con muchos años de antigüedad que ha sido objeto de estudio por su uso en etnobotánica con relación a tratamientos de diferentes afecciones, convirtiéndola en una planta medicinal. Actualmente se conoce que el orégano hace parte de las especies que producen aceite esencial y sus metabolitos secundarios son responsables de su actividad antimicrobiana y antioxidantes, entre los que más resaltan son el carvacrol y el timol. Es por ello, que el aceite esencial de orégano es protagonista en múltiples estudios en donde comprueban dichas actividades fitoterapéuticas ya mencionadas.

Por otro lado, hay una problemática en auge debido a que se han reportados muchos casos de intoxicación por ingesta de alimentos contaminados por microorganismo, tal como lo reporta SIVIGILA, lo cual afecta la seguridad alimentaria siendo esto un tema crítico a tratar, ya que impacta directamente en la salud pública. Es por ello, que se abordó el tema con la bacteria Listeria monocytogenes, ya que es uno de los principales causantes de ETAS y también es uno de los principales contaminantes en productos cárnicos y lácteos. Por ende, se busca afirmar que la actividad antimicrobiana del aceite esencial puede ayudar con esta problemática.

A continuación, en el marco referencial abordará la especie (origanum vulgare) con relación a la seguridad alimentaria en la parte de estas.

6.1 Marco teórico

6.1.1 Origanum Vulgare

Fig 1. Planta de orégano Tomado de: https://www.plantarium.ru/lang/en/page/image/id/633436.html El Origanum Vulgare o también conocido como orégano común, es una planta utilizada comúnmente en preparaciones culinarias como condimento o aditivo, esta hierba da un aroma y sabor particular a las comidas, aun cuando sus hojas están frescas o secas. El orégano pertenece a la familia de las Lamiaceae y según estudios es nativa de Asia y regiones mediterráneas. Su clasificación taxonómica se presenta en la tabla 1.

Tabla 1. Clasificación taxonómica del Origanum vulgare. Reino Plantae División Magnoliophyta Clase Magnoliopsida Orden Lamiales Familia Lamiaceae Subfamilia Nepetoideae Género Origanum Especie vulgare

Nombre binomial Origanum vulgare Nombre común Orégano Datos tomados de: Efecto antimicrobiano del aceite esencial de *Origanum vulgare* sobre el crecimiento de *Listeria monocytogenes* con potencial uso en películas antimicrobianas aplicadas en la industria láctea" por A. L. Corredor Espinel, 2021, Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá D.C.

Esta hierba aromática perenne, de 30–50 cm de altura, con flores blancas o púrpuras, con hojas opuestas, lanceoladas y dentadas. Aunque es conocida en todo el mundo como hierba aromatizante, también se utiliza en la medicina tradicional por sus efectos sobre la salud, principalmente contra trastornos bronquiales, como digestivo y antiséptico, para tratar resfriados, indigestiones y trastornos estomacales. Las partes aéreas contienen una amplia gama de componentes medicinalmente activos, incluyendo glucósidos fenólicos, flavonoides, taninos, esteroles y altas cantidades de terpenos. Su contenido puede variar debido a la presencia de diferentes quimiotipos en la misma especie, región geográfica de origen y época de cosecha,estos y otros factores pueden dar lugar a diferentes efectos farmacológicos.(Vitalini, Irit, 2017).

En Colombia se pueden cultivar y cosechar muchas plantas que contienen aceites esenciales.

Variedades como el orégano (Origanum vulgare), el romero (Rosmarinus officinalis), entre muchas otras, se están utilizando ahora en diferentes áreas como los jarabes medicinales tradicionales. En 2010, Colombia exportó aproximadamente 8400 toneladas métricas de ingredientes botánicos y naturales. Después del procesamiento (hierba seca), los precios internacionales (en el mercado) del orégano pueden variar de 3,31 a 6,28 USD/kg (principal productor Turquía).(Moncada et al., 2016, 172-181)

6.1.2 Aceites esenciales ( AE)

Los aceites esenciales esenciales son sustancias oleosas aromáticas, extraídas de diferentes partes de las plantas (raíces, hojas , tallos, semillas, brotes y corteza). Son definidos como mezclas de compuestos volátiles productos del metabolismo

secundario de las plantas, los cuales poseen gran variedad de aplicaciones, como las farmacológicas donde son implementados como excipientes y aromatizantes para la preparación de jarabes o suspensiones, en la industria cosmética hacen uso de estos para la elaboración de fragancias y productos que se basan en las funciones específicas de ciertas esencias sobre la piel, otro gran uso que se le da a los aceites esenciales es por medio de la aromaterapia, que se considera como una disciplina de la medicina natural que se enfoca en el uso de AE para la elaboración de tratamientos. Se conoce que los aceites esenciales (AE) poseen actividad antioxidante y antimicrobiana, razón por la cual es posible hacer uso de estos como aditivos naturales en productos alimenticios, esta actividad antimicrobiana generalmente es conferida por la composición química de los diferentes AE, estos suelen ser terpenos (monoterpenos y sesquiterpenos), compuestos aromáticos (aldehídos, alcoholes y fenoles) y terpenos (isoprenoides). (Corredor Espinel, 2021) La mayoría de plantas contienen de 0,01 a 10% de contenido de aceite esencial. La cantidad media que se encuentra en la mayoría de las plantas aromáticas es alrededor de 1 a 2%. Regularmente el contenido de aceites esenciales aumenta después de la lluvia y alrededor del mediodía, cuando se ha eliminado el agua de rocío depositada sobre la planta, y ha comenzado una deshidratación antes de la humedad relativa alta de la noche. (Servicio Nacional de Aprendizaje (SENA), 2012)

6.1.3 Metabolitos secundarios del orégano

El aceite esencial de orégano vulgare posee varios compuestos, entre ellos se han encontrado ácidos coumérico, ferúlico, caféico,ácido r -hidroxibenzóico y vainillínico y ácido rosmarinico Mirceno, a -terpineno r -cimeno, g -terpineno, timol, carvacrol, b -cariofileno (Arcila-Lozano et al., s. f.). Pero los que se encuentran en mayor proporción son el carvacrol y el timol a los cuales se les atribuyen sus propiedades antimicrobianas y antioxidantes.

Carvacrol Fig 2. Estructura del carvacrol Tomado de :

https://www.researchgate.net/figure/Chemical-structure-of-carvacrol_fig5_35878452

9

El carvacrol o también conocido como cimofenol es un compuesto fenólico, (monoterpenoide), el cual es responsable del olor característico orégano, según diferentes literaturas reportadas se encuentra un porcentaje de carvacrol en los aceites esenciales entre (10%-80%). El carvacrol es destacado por su propiedad antimicrobiana, por tal ha sido centro de investigación en donde se evalúa el potencial de inhibición frente a bacterias y hongos Timol

Fig 3. Estructura de timol Tomado de:

https://enembulando.com.br/questoes/o-timol-%C3%A9-encontrado-em-oleos-essen ciais El timol es un compuesto monoterpénico, fenólico y es un isómero de carvacrol. El timol se encuentra en varios aceites esenciales como en el tomillo y el orégano y al igual que el carvacrol tiene propiedades antisépticas, antimicrobianas y antioxidantes.

6.1.4 Propiedades Antimicrobianas del AE de orégano

Numerosos estudios han demostrado que los componentes principales que producen un efecto bactericida o bacteriostático frente a distintos patógenos son el timol y carvacrol los cuales se encuentran en mayor proporción en el AE de orégano, estos compuestos fenólicos constituyen alrededor del 78 al 85% del aceite esencial. Su actividad antimicrobiana se atribuye a su actividad lipofílica, razón por la cual generan daños en las estructuras de la membrana celular, provocando la expansión de esta ocasionando un aumento en la fluidez y la permeabilidad, inhibiendo la respiración, altera los procesos de transporte de iones, afecta la actividad proteica.

Fig 4. Mecanismo de acción del timol y carvacrol sobre la membrana plasmática de una bacteria.

Tomado de. (Espino Benítez, 2021) El carvacrol es un compuesto fenólico presente en los aceites esenciales que más ha recibido atención en su mecanismo de acción y capacidad bactericida, capaz de desintegrar la membrana externa de las bacterias Gram negativas, provocando la salida de lipopolisacáridos y aumentando la permeabilidad de la membrana plasmática. Estudios sugieren que el modo de acción del carvacrol es incrementar la fluidez y permeabilidad de la membrana. Se ha establecido que incrementar la fluidez de la membrana incrementa la permeabilidad. Dicha permeabilidad ha sido confirmada mediante el monitoreo del eflujo de H+, K+, y ATP, y la entrada de ácidos nucleicos.(Araujo, 2019) El timol, considerado por muchos autores como uno de los componentes con mayor actividad antimicrobiana de los aceites esenciales, el cual, contiene una estructura química muy similar a la del carvacrol, diferenciándose por la posición de un grupo hidroxilo. Así mismo, posee un mecanismo de acción parecido al de carvacrol. Al

igual que el carvacrol, el timol causa daño a la membrana citoplasmática. Su modo de acción aún no ha sido estudiado a fondo, pero se cree que causa disrupción en la membrana interna y externa, e interactúa con las proteínas presentes en la membrana celular. (Araujo, 2019)

6.1.5 Listeria Monocytogenes

La Listeria monocytogenes pertenece a un grupo de 6 especies del género Listeria, este se encuentra distribuido ampliamente en la naturaleza y se puede encontrar en humanos, mamíferos, aves, plantas y suelos. Es conocido por ser causante de infecciones en neonatos, ancianos, mujeres embarazadas y pacientes con deficiencia de la inmunidad celular. Este patógeno es el responsable de infecciones alimentarias más violentas, con una tasa de mortalidad entre un 20 a 30%, más alta comparado con las enfermedades transmitidas por alimentos. Es responsable de la listeriosis y meningitis. (Ale & Daibby, 2018) Es una bacteria Gram positiva en forma de bacilo corto (0,4 a 0,5 u de ancho x 0,5 a 1,2 u de largo) no ramificado,anaerobio facultativo capaz de multiplicarse en un amplio rango de temperaturas (-7°C a 45°C) con una elevada concentración de sal. No tiene cápsula ni espora, tiene flagelos perítricos, debido a esto tiene movilidad a 30°C o menos, pero es inmóvil a 37°C.(Ale & Daibby, 2018) Listeria monocytogenes puede adherirse a células hospedadoras mediante la interacción de las proteínas de la superficie bacteriana. Se implanta en el citoplasma de la célula, prolifera y se disemina en las células adyacentes, su unión a la célula del huésped se da por una proteína llamada“integrina”, luego es fagocitada por la célula del huésped, en el fagolisosoma es expuesta a un ambiente con un pH bajo, activando una exotoxina que es capaz de destruir la membrana del fagolisosoma en

30 minutos y escapar al citoplasma. Esta exotoxina hemolítica y citotóxica es una

causa crítica de virulencia de este microorganismo, conlleva a una interrupción de las membranas fagolisosomicas y a un crecimiento sin restricciones de Listeria dentro del fagocito.(Ale & Daibby, 2018)

Las cepas L. monocytogenes y L. ivanovii son las más asociadas a infecciones en humanos, causando la enfermedad denominada listeriosis con un cuadro clínico grave caracterizado por fiebre, escalofríos, cefaleas, mareos y síntomas gastrointestinales como dolor y diarrea. El Centro de Control y Prevención de Enfermedades (Center of Disease Control and Prevention, CDC) estima que el número de personas con listeriosis por año es de 1,600, siendo los más afectados las mujeres embarazadas y sus recién nacidos, personas inmunocomprometidas y adultos mayores a los 65 años. (Pimentel Gonzalez, 2024)

6.1.6 Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA)

Las ETA son producidas por alimentos o bebidas contaminadas por algún microorganismo patógeno. Según la organización panamericana de la salud Un brote de Enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) es definido como un incidente en el que dos o más personas presentan una enfermedad semejante después de la ingestión de un mismo alimento y los análisis epidemiológicos apuntan al alimento como el origen de la enfermedad. Los brotes y casos de ETA registrados representan apenas la "punta del iceberg". La probabilidad de que un brote o caso se reconozca y notifique por las autoridades de salud depende, entre otros factores, de la comunicación de los consumidores, del relato de los médicos y de las actividades de vigilancia sanitaria de las secretarías municipales, departamentales y provinciales de salud. (Organización Panamericana de la Salud,S.F) La listeriosis es una de las ETA más comunes ,producidas por la Listeria Monocytogenes , afecta principalmente a pacientes inmunocomprometidos, mujeres embarazadas, recién nacidos y adultos mayores. Esta enfermedad se puede presentar de dos maneras, de forma invasiva y no invasiva; en el proceso de embarazo esta infección se presenta de forma invasiva donde puede provocar abortos espontáneos, muerte fetal, o partos prematuros, si bien esta infección en las madres se presenta de forma no invasiva, se puede transmitir de manera vertical, es decir, el feto puede adquirir la listeriosis presentando síntomas como la septicemia, apatía y mala alimentación.(Corredor Espinel, 2021)

Una de las formas clínicas más comunes de listeriosis es la listeriosis gastrointestinal no invasiva, caracterizada por una fiebre leve acompañada de problemas gastrointestinales que por lo general tienen una duración de 24 h, sin embargo, existe la forma invasiva donde puede presentarse en forma de cefalea hasta una meningitis, encefalitis y otros problemas potencialmente fatales.De acuerdo coninformación relevante de este patógeno reportada por el Bad Bug Book, es asociado a una gran cantidad de alimentos de origen animal y vegetal, tanto vegetales y leche crudos,helado, chocolates, quesos, carnes rojas, embutidos, pescados y mariscos, entre otros, que pueden ser contaminados durante toda la cadena de suministro y su identificación requiere de procesos complejos y consumo de materiales de alto costo. (Pimentel Gonzalez, 2024)

6.2 Marco Conceptual

En base a lo anteriormente expuesto y el contexto hacia dónde va dirigida esta investigación, es de vital importancia establecer conceptos claves que permitan entender más a profundidad el tema. La Organización Mundial de la Salud (OMS), define las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA) como aquellas que resultan de la ingestión de alimentos que contienen microorganismos patógenos, los cuales se pueden encontrar en cualquier etapa de la cadena de producción, suministro y consumo de estos. Pueden deberse a varias formas de contaminación ambiental, como la polución del agua, el suelo o el aire, así como al almacenamiento y transformación de alimentos insalubres. Según el Instituto Nutricional de Centro América y Panamá (INCAP) y basado en las Cumbres Presidenciales de Centro América (SICA, 2002), la Seguridad Alimentaria y Nutricional es un estado en el cual todas las personas gozan, en forma oportuna y permanente, de acceso físico, económico y social a los alimentos que necesitan, en cantidad y calidad, para su adecuado consumo y utilización biológica, garantizándoles un estado de bienestar general que coadyuve al logro de su desarrollo. (Organización Panamericana de la Salud, 2010)

Conforme a la asociación francesa de normalización y la Farmacopea Europea un “Aceite Esencial” puede definirse como un “producto obtenido a partir de una materia prima natural de origen vegetal, ya sea por destilación con agua o vapor, o a partir del epicarpio de frutos de Citrus sp. mediante un procedimiento mecánico, o por destilación en seco.Las plantas pueden sintetizar dos tipos de aceites: aceites fijos y esenciales. Los aceites fijos son ésteres de una molécula de glicerol unida a tres ácidos grasos, también llamados triacilgliceroles o triglicéridos. Los aceites esenciales (AE), también conocidos como esencias, aceites volátiles, aceites etéricos o aetheroleum, son mezclas naturales complejas de sustancias volátiles, lipofílicas y odoríferas que se encuentran comúnmente en las plantas aromáticas. (de Sousa, 2023).

Los AE , como ya se mencionó anteriormente contienen una gran variedad de componentes volátiles, entre los cuales se encuentran los metabolitos secundarios, estos son compuestos orgánicos producidos por varios organismos vivos, los cuales son utilizados como mecanismo de defensa y son usados a menudo en la industria farmacéutica como activos.(de Sousa, 2023).

Es de vital importancia además de conocer terminología sobre el aceite esencial, identificar las técnicas utilizadas para extraer estos compuestos y que se evalúa en estos para saber si tiene un efecto antimicrobiano. A continuación se presentarán algunos términos que abarcan lo dicho anteriormente.

Destilación: Es la forma tradicional de aislar compuestos volátiles como lo son los AE del material vegetal, durante el proceso de destilación las plantas aromáticas expuestas al vapor o al agua hirviendo liberan sus AE a través de la evaporación, al ser dos líquidos inmiscibles (agua y aceite) se facilita la recuperación del AE. Existen diferentes tipos de destilación, dentro de los cuales se encuentran; destilación HD, destilación agua/vapor y destilación por arrastre de vapor, siendo esta última la más utilizada para la obtención de AE a gran escala, sin embargo, el aumento de la demanda, y la necesidad de llevar a cabo estos procesos de manera rápida en la industria hoy en día representa una pérdida costosa de tiempo y

energía, además de favorecer la degradación de compuestos sensibles al calor.(Corredor Espinel, 2021) Extracción con fluidos supercríticos: Este método hace circular a través del material vegetal cortado en trozos un líquido supercrítico que en la mayoría de los casos es dióxido de carbono líquido que actúa como solvente extracto,esto permite que las esencias sean solubilizadas y arrastradas, este líquido se elimina por descompresión, obteniendo así una esencia pura.(Corredor Espinel, 2021) Concentración Mínima Inhibitoria (MIC): Es la concentración más baja de un fármaco antimicrobiano (como un antifúngico, antibiótico o bacteriostático) que inhibe el crecimiento visible de un microorganismo después de la incubación. (Pimentel Turino et al., 1999) y se determina mediante métodos de dilución en caldo. Los métodos de dilución son apropiados para la determinación cuantitativa de la actividad antimicrobiana, la técnica más utilizada es la denominada concentración mínima inhibitoria (CMI), con la cual se define la concentración mínima capaz de inhibir el crecimiento visible del microorganismo. Esta técnica puede ser mejorada con la ayuda de indicadores REDOX, que son utilizados generalmente para la determinación del crecimiento/viabilidad microbiana. (Bauer, 2016) Concentración Mínima Bactericida (CMB) : La Concentración Mínima Bactericida (CMB) se define como la menor concentración de antimicrobiano que ha matado el 99,9% del inóculo original, equivalente a una disminución de 3 logaritmos decimales. El recuento se realiza habitualmente mediante técnicas de cultivo. Para calcular la CMB se emplean métodos en los que bacterial y anti microbiano se enfrentan en un caldo, concretamente de los métodos de macro o micro dilución que se utilizan para la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI). (Bauer, 2016) Actividad Antimicrobiana: Es la capacidad que tiene una sustancia para inhibir o mitigar la proliferación de microorganismos y se puede cuantificar a través de la técnica cantidad mínima inhibitoria, demostrando así que tan eficaz puede ser compuesto frente a un microbio específico.Dentro de los principales métodos de

evaluación preliminar de la actividad antimicrobiana se encuentran los métodos de difusión en disco y difusión del pozo en agar, mediante los cuales se determina en forma cualitativa el efecto antimicrobiano de los extractos de plantas sobre los microorganismos de interés, los resultados obtenidos se expresan midiendo el diámetro de los halos de inhibición producido por los extractos. (Bauer, 2016) Halos de inhibición: Es la zona alrededor de un disco de antibiótico en un lugar Antibiograma en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar inoculado.(Chapa.B.,2018)

6.3 Marco Legal

Las normas, reglamentos o leyes que se presentan a continuación, son esenciales para el desarrollo de esta investigación, permitiendo un conocimiento íntegro sobre la seguridad alimentaria de productos cárnicos y lácteos en Colombia. Estas regulaciones permiten un desarrollo del marco normativo y la evaluación de las posibles implicaciones legales que podría tener el uso de aceites esenciales como el aceite de orégano (Origanum vulgare), en el control de patógenos. Este análisis no solo permitirá conocer las normas vigentes en colombia, sino que también se tomará entes gubernamentales de otros países para comprender las posibles regulaciones futuras que podrían influir en la aplicación de métodos alternativos para garantizar la inocuidad alimentaria.

PSAN – Conpes 113 de 2007 : Colombia cuenta en estos momentos con una Política Nacional de Seguridad Alimentaria y Nutricional (PSAN), aprobada por el Consejo Nacional de Política Económica y Social (Conpes) , en este documento se establecen directrices y estrategias para mejorar el acceso y la calidad de los alimentos para todos los ciudadanos, especialmente en la población vulnerable. Resolución 4282 de 2007 : Esta resolución establece el reglamento técnico sobre los requisitos sanitarios y de inocuidad de la carne y productos cárnicos comestibles de la especie porcina destinada para el consumo humano y las disposiciones para

su beneficio, desposte, almacenamiento, comercialización, expendio, transporte, importación o exportación Decreto 1500 de 2007 : Mediante este decreto se crea el Sistema Oficial de Inspección, Vigilancia y Control de la Carne, Productos Cárnicos Comestibles y Derivados Cárnicos Destinados para el Consumo Humano y los requisitos sanitarios y de inocuidad que se deben cumplir en su producción primaria, beneficio, desposte, desprese, procesamiento, almacenamiento, transporte, comercialización, expendio, importación y/o comercialización en el país y se dictan otras disposiciones. Resolución 2154 de 2012: Mediante esta resolución se establece el reglamento para los aceites y grasas de origen vegetal o animal que se procesan ,envasan o almacenan, transportan, exportan, importan y/o comercializan en el territorio, destinados para el consumo humano.

Resolución 1407 de 2022: El ministerio de salud y protección social emite esta resolución con el fin de establecer los criterios microbiológicos que deben cumplir los alimentos y bebidas destinadas para el consumo humano Resolución 2834 de 2008:Por la cual se adopta el Vademécum de Plantas Medicinales Colombiano y se establecen los lineamientos para su actualización. Ley 9 de 1979 : Esta ley regula varios aspectos relacionados con la salud pública y seguridad sanitaria en el país, en donde se pone en evidencia los aspectos críticos que se deben tener en cuenta para la conservación de los alimentos de consumo humano.

Resolución 02310 de 1986:Reglamenta parcialmente lo referente al procesamiento composición, requisitos, transporte y comercialización de los Derivados Lácteos.

7°METODOLOGÍA

Este trabajo se realizó a través de una investigación exhaustiva, centrada en la recopilación sistemática de información sobre el aceite esencial de orégano como agente antimicrobiano frente a Listeria monocytogenes. Asimismo, se evaluó la importancia de uso de una agente antimicrobiano origen natural para mejorar la seguridad alimentaria de productos cárnicos y lácteos Para llevar a cabo dicho proceso, se extrajo información de investigaciones académicas de distintas universidades, revistas de divulgación científica, tesis y artículos publicados en distintos idiomas y en diversas bases de datos confiables como Science Direct, scopus, pubmed, elsevier, google académico,Springer, entre otros, usando descriptores de búsqueda como; “origanum vulgare como antimicrobiano”, “aceite esencial de orégano”, “carvacrol” “actividad antimicrobiana frente Listeria monocytogenes”, “Listeria monocytogenes en la industria alimentaria”,“seguridad alimentaria en productos cárnicos y lácteos”, “metabolitos secundarios presentes en el orégano”.

Por otro lado, se tuvieron en cuenta los criterios de inclusión en el momento de la búsqueda para dar curso al desarrollo de esta monografía los cuales están relacionados con la actividad antimicrobiana del aceite de orégano frente Listeria monocytogenes en productos lácteos y cárnicos, su taxonomía y forma de extracción. Los métodos de inclusión que se utilizaron para esta investigación se nombran a continuación:

Fecha de publicación : Para comprobar que la información sea reciente y de calidad, se tomó como fuentes los trabajos publicados en los últimos 10 años (2014 a 2024).

Información veraz: La información que sea recopilada debe ser de fuentes confiables como revistas de investigación reconocidas o bases de datos que proporcionen evidencia científica robustas.

Idioma de publicación : Los Antimicrobial Activity of Oregano Essential Oil Incorporated in Sodium Alginate Edible Films:

artículos o investigaciones deben ser de fácil acceso y el idioma en que se debe encontrar preferiblemente tiene que ser español, inglés o portugues Geografía : Las investigaciones realizadas preferiblemente se deben haber realizado en países de américa latina y el caribe , aunque no se descartan publicaciones de otros países y se utilizaran para el desarrollo de esta monografía Por el contrario, dentro de los criterios de exclusión se tuvieron en cuenta documentos que no cumplieran con los estándares de calidad anteriormente mencionados. Se excluyeron aquellas investigaciones que no sean de fácil acceso para la lectura o estén en idiomas como el mandarin y arabe. Asimismo se descartaron documentos que no estuvieran dentro del periodo de 10 años desde su día de publicación. Por último también se excluyó aquellos documentos que no guardan relevancia con los objetivos planteados en esta monografía. La idea utilizada para desarrollar esta investigación bibliográfica fue abordar de lo general a lo específico, empezando por su taxonomía, propiedades, metabolitos secundarios, acción fitoterapéutica, revisión de sus propiedades antimicrobianas, inspección de la información frente a la bacteria listeria monocytogenes y su importancia en la seguridad alimentaria de productos lacteos y carnicos. Lo anteriormente mencionado enmarca la implementación de procesos de selección que se dividen en diferentes fases. En primer lugar se realiza una revisión del título y resumen del documento en donde se evalúa si está alineado con los objetivos de la investigación, si esta información es útil , se procede a verificar que el documento sea de fácil acceso y permita una lectura completa de este. Por último se realiza una inspección minuciosa donde se verifica que el material seleccionado sea de calidad y confiable.

Finalmente se abordó críticamente la problemática relacionada con esta bacteria y como el aceite esencial de orégano puede ser una alternativa natural, esto gracias a la cantidad de información recopilada, lo cual permitió reunir ideas y dar un abordaje general de la propiedad antimicrobiana del (origanum vulgare).

8° DESARROLLO DEL TEMA

A lo largo del documento se han presentado los resultados de la revisión sistemática sobre la caracterización del aceite esencial de orégano (Origanum vulgare) y sus métodos de extracción. Se evaluó el uso del aceite esencial de orégano frente a Listeria monocytogenes mediante el análisis de estudios in vitro, por ende la actividad antimicrobiana del aceite esencial de orégano sería una alternativa para la problemática de la seguridad alimentaria de productos cárnicos y lácteos. De acuerdo a la información plasmada, en la Tabla 2 se observa los resultados que se obtuvieron después de aplicar los criterios de inclusion y exclusion en la distintas fuentes de busqueda, asimismo en la Tabla 3 se representa de manera estructurada las variables bibliográficas que se tuvieron en cuenta para la selección de los documentos que se van a tomar de referencia para el desarrollo del tema, asegurando de esta manera que la calidad de la información y relevancia en las publicaciones hechas por distintos autores.

Tabla 2. Cantidad de resultados por fuente de búsqueda Fuente de búsqueda Número de artículos seleccionados Sciencedirect

16

Scopus

3

Multidisciplinary Digital Publishing Institute (MDPI)

3

SpringerLink

3

ResearchGate

2

Repositorio de la universidad Javeriana

1

Repositorio de la UNTRM

Universidad Catolica de el Salvador

1

Repositorio de la UAP

1

Scielo

1

Tabla 3. Cuadro bibliográfico y Variables de búsqueda Criterios de Búsqueda °N Plataforma Idioma del texto Año de publicación Descripción de la búsqueda Titulo del articulo Inglés Español

1

x

2021

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Zhao et al.,2021) Chemical composition and antifungal activity of essential oil from Origanum vulgare against Botrytis cinerea

2

x

2013

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Baranauskienė et al.,

2013)

Harvesting time influences the yield and oil composition of Origanum vulgare L. ssp. vulgare and ssp. hirtum Caracterización química del aceite esencial de (Andi & Maskani, 2021) Essential oil chemical diversity of twenty

x

2021

orégano(Origanum Vulgare) Iranian Origanum vulgare L. subsp.

viride populations

4

x

2021

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Ye et al., 2021) Chemical composition of essential oils from Thymus mongolicus, Cinnamomum verum, and Origanum vulgare and their acaricidal effects on Haemaphysalis longicornis (Acari:

Ixodidae)

5

x

2018

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Khan et al., 2018) The composition of the essential oil and aqueous distillate of Origanum vulgare L.

growing in Saudi Arabia and evaluation of their antibacterial activity

Sciencedirect

6

x

2024

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Luo et al., 2024) Synergistic bactericidal effect of ultrasound combined with oregano essential oil nanoemulsion on Listeria monocytogenes and its application in blueberry preservation

7

x

2024

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (da Silva et al., 2012) Exposure of Listeria monocytogenes to sublethal amounts of Origanum vulgare L.

essential oil or carvacrol in a food-based medium does not induce direct or cross protection

8

x

2023

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Lastra- Vargas et al.,

2023)

Oregano essential oil as an alternative antimicrobial for the control of Listeria monocytogenes and Salmonella in Turkey mortadella during refrigerated storage.

x

2021

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Takundwa et al., 2021) Antimicrobial efficacy of nisin, oregano and ultrasound against Escherichia coli O157:H7 and Listeria monocytogenes on lettuce

10

x

2024

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Guo et al., 2024) Inhibitory effect and mechanism of oregano essential oil on Listeria monocytogenes cells, toxins and biofilms

11

x

2022

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (De Campos et al.,

2022)

Antimicrobial effect of Origanum vulgare (L.)

essential oil as an alternative for conventional additives in the Minas cheese manufacture

x

2019

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (Diniz-Silva et al., 2019) A synergistic mixture of Origanum vulgare L.

and Rosmarinus officinalis L.

essential oils to preserve overall quality and control Escherichia coli O157:H7 in fresh cheese during storage

13

x

2022

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (Sivaram et al., 2022) The beneficial role of plant based thymol in food packaging application: A comprehensive review

14

x

2009

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (Mastromatteo et al.,

2009)

Combined effects of thymol, carvacrol and temperature on the quality of non conventional poultry patties Uso del aceite de orégano para la (Wang et al., 2023) Antibacterial food

x

2023

mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos packaging capable of sustained and unidirectional release carvacrol/thymol nanoemulsions for pork preservation

16

x

2021

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (Rathod et al., 2021) Biological activity of plant-based carvacrol and thymol and their impact on human health and food quality

17

Scopus x

2014

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Hernández-Hernández et al., 2014) Microencapsulation, Chemical Characterization, and Antimicrobial Activity of Mexican (Lippia graveolens H.B.K.)

and European (Origanum vulgare L.)

Oregano Essential Oils Caracterización química del aceite (Carrasco et al., 2016) Origanum vulgare and

x

2016

esencial de orégano(Origanum Vulgare) Thymbra capitata Essential Oils from Spain:

Determination of Aromatic Profile and Bioactivities

19

x

2018

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Stešević et al., 2016) Chemical Characterization of Wild Growing Origanum vulgare Populations in Montenegro

20

SpringerLink x

2019

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Khan et al., 2019) Chemical diversity in leaf and stem essential oils of Origanum vulgare

L. and their effects

on microbicidal activities

21

x

2019

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Fikry et al., 2019) Chemical profiling, biostatic and biocidal dynamics of Origanum vulgare L. essential oil (Hać-Szymańczuk et al.,

2019)

x

2018

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos Evaluation of antioxidant and antimicrobial activity of oregano (Origanum vulgare L.) preparations during storage of lowpressure mechanically separated meat

(BAADER

meat) from chickens

23

ResearchGate x

2020

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (Heni et al., 2020) Use of Origanum vulgare Essential Oil as an Antibacterial Additive in the Preservation of Minced Meat

24

x Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Vinciguerra et al., 2020) Multiple analytical approaches for the organic and inorganic characterization of Origanum vulgare L.

samples (Chapa.B.,2018)

EFECTO

ANTIMICROBIANO DEL

Repositorio de la UNTRM x

2018

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes

ACEITE ESENCIAL DE

ORÉGANO

(Origanum vulgare L.)

SOBRE

Listeria monocytogenes EN

QUESO FRESCO

26

Repositorio de la universidad Javeriana x

2021

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Corredor Espinel, 2021) Efecto antimicrobiano del aceite esencial de Origanum vulgare sobre el crecimiento de Listeria monocytogenes con potencial uso en películas antimicrobianas aplicadas en la industria láctea

27

UAP

x

2024

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Flores Ale et al., 2018) “Efecto sinérgico del aceite esencial de Thymus vulgaris (tomillo) y Origanum vulgare (orégano) sobre la actividad antimicrobiana frente a Listeria monocytogenes y Salmonella enteritidis”

MDPI

x

2019

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Pavli et al., 2019) Antimicrobial Activity of Oregano Essential Oil Incorporated in Sodium Alginate Edible Films:

Control of Listeria monocytogenes and Spoilage in Ham Slices Treated with High Pressure Processing

29

x

2023

Efecto antimicrobiano del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes (Kolypetri et al., 2023) Chemical Composition, Antibacterial and Antibiofilm Actions of Oregano (Origanum vulgare subsp. hirtum) Essential Oil against Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes

30

x

2020

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (Mahgoub et al.,2020) Improving the Quality of Turkey Meat via Storage Temperature, Packaging Atmosphere, and Oregano

(Origanum vulgare) Essential Oil Addition

31

Universidad Catolica de el Salvador x

2020

Uso del aceite de orégano para la mejora de la seguridad alimentaria en productos carnicos y lacteos (de Escalante et al.,

2020)

Determinación de la concentración mínima y máxima del extracto de orégano (Origanum vulgare) como sustituto natural para preservar productos cárnicos

32

Scielo x

2013

Caracterización química del aceite esencial de orégano(Origanum Vulgare) (Acevedo et al.,2013) Composición Química del Aceite Esencial de Hojas de Orégano (Origanum vulgare)

8.1

ACEITE ESENCIAL DE ORÉGANO (Caracterización del aceite esencial de orégano) ( Ver anexo 1) TABLA Caracterizacion de oregano Los datos presentados ofrecen una comprensión más precisa de la composición química del Origanum vulgare, una especie distribuida globalmente, con mayor presencia en la región del Mediterráneo. Esto también se refleja en la cantidad de investigaciones provenientes de dicha zona, incluidas en esta monografía. La composición química del orégano es altamente variable, lo que significa que la proporción de sus compuestos puede cambiar considerablemente según distintos factores. Esta variabilidad se debe a las condiciones de crecimiento de la planta, la fecha de cosecha (estado de madurez), la parte de la planta utilizada y los factores genéticos, como se ha evidenciado en los estudios revisados. A partir de estos datos, el orégano se clasifica según el compuesto predominante, dando lugar a los llamados "quimiotipos". Los principales quimiotipos son los de carvacrol, timol, linalol, γ-terpineno y p-cimeno, siendo el carvacrol y el timol los más destacados debido a sus potentes propiedades antimicrobianas y antioxidantes. Se ha demostrado que la composición química del orégano varía según el país donde se cultiva y a las condiciones mencionadas anteriormente.

Los compuestos se agrupan en varias categorías, como los monoterpenos oxigenados (carvacrol, timol, α-terpineol y linalool), los hidrocarburos monoterpénicos (γ-terpineno y p-cimeno), y los sesquiterpenos (β-cariofileno y germacreno D), los cuales pueden subdividirse en hidrocarburos sesquiterpénicos y sesquiterpenos oxigenados, tal como lo mencionan Stešević et al. (2016) y Andi & Maskani (2021).

Otro aspecto interesante es el solvente utilizado para diluir el aceite esencial durante la identificación de los componentes. En este caso, se emplearon metanol y pentano, lo que resultó en diferencias significativas tanto en la cantidad de compuestos identificados como en los porcentajes de estos.

También se analizó la composición del aceite esencial de orégano y el hidrosol (fase acuosa del destilado). Se encontró un mayor porcentaje de carvacrol en el hidrosol que en el aceite esencial, debido a la ligera solubilidad de este compuesto en agua. Sin embargo, este fenómeno requiere una investigación más profunda. Adicionalmente, se evaluó en qué parte de la planta de orégano se hallaban mayores concentraciones de compuestos de interés. En el caso del carvacrol, los resultados mostraron porcentajes similares entre las hojas y los tallos. Se evaluó también la cantidad de compuestos presentes en el Origanum vulgare tanto en material seco como fresco, obteniéndose mejores resultados con el material seco. Además, se estudió el impacto del período de cosecha, comparando las etapas de rebrote, antes de la floración, plena floración y después de la floración. Los mejores resultados en términos de concentración de compuestos se obtuvieron durante la plena floración.

En todos los estudios mencionados en esta monografía, se utilizó hidrodestilación mediante un aparato tipo Clevenger para la extracción del aceite esencial a partir de material vegetal seco. La destilación se realizó por un periodo de tiempo entre 3 y 4 horas, y los rendimientos obtenidos oscilaron entre el 0,2% y el 2%, según los estudios revisados.

8.2 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA (Determinar el uso potencial del aceite

esencial de orégano (Origanum vulgare) contra Listeria monocytogenes mediante la revisión de estudios in vitro).

( ver anexo 1) TABLA Caracterizacion de oregano Los resultados obtenidos a partir de la revisión bibliográfica sobre el posible uso potencial uso del aceite de orégano como agente antimicrobiano frente a la Listeria monocytogenes son prometedores. Esto se debe a que en la revisión bibliográfica que abarcó 10 artículos en las conclusiones fue evidente que con el uso del aceite de orégano en distintas presentaciones logra disminuir lógicamente la concentración de microorganismos en el medio.

De acuerdo con lo anteriormente expuesto se presentan los siguientes ejes en donde se va a desarrollar y discutir los resultados encontrados a partir de esta investigación

8.2.1 Determinación de la CMI O CMB

8.2.2 Ensayos in vitro y Resultados Obtenidos

8.2.3 Metodología sinérgicas utilizadas contra la Listeria monocytogenes

8.2.4 Especies reactivas de oxígeno (ROS) y contenido de malondialdehído (MDA)

frente a la Listeria monocytogenes.

8.2.5 Estudios sensoriales realizados a productos utilizados en ensayos in vitro con

aceite de orégano.

Para una mejor comprensión sobre los ejes que se van a desarrollar en las siguientes páginas, a continuación se presenta en la Tabla 5 que lleva como título Actividad antimicrobiana del aceite de orégano frente a la Listeria monocytogenes. Lo cual es un pequeño resumen sobre los resultados obtenidos en las distintas investigaciones que a continuación se van a discutir.

Los métodos más utilizados para calcular la CMI son la microdilución en caldo y difusión de agar.

La CMI Y CMB varian entre 0.8 % a 0,02 % v/v del aceite esencial de orégano, esta puede variar según la zona de crecimiento del orégano, las condiciones de cultivo de este y la concentración de timol y carvacrol Microdilución en caldo

8.2.1

La concentración mínima inhibitoria y bactericida se conoce como la cantidad mínima de una antimicrobiano que es capaz de inhibir el crecimiento bacteriano o generar la muerte o lisis del microorganismo. En los distintos artículos que se mencionan en la Tabla 5 se conocen diversas metodologías para determinar la CMI o CMB.

De acuerdo a esto,la primera metodología que se encontró fue mencionada en algunos artículos y lleva como nombre microdilución en caldo .A grandes rasgos esta prueba se realiza en una placa de poli-estireno que contiene aproximadamente

96 celdillas. Una placa puede contener de 7 a 8 diluciones de 12 diferentes agentes

antimicrobianos. Una celdilla sirve como control positivo (caldo más inóculo), y otro sirve como control negativo (sólo caldo). La mayoría de los sistemas tienen un volumen de 0.1 mL en cada celdilla.(Cavalieri.,et al 2005) Según lo reportado por distintos autores que llevaron a cabo esta metodología, las concentraciones iniciales bacterianas fueron 5 × 10^5 UFC/mL para microdiluciones y para macrodiluciónes en caldo fue 7 log de UFC/mL.Por otro lado las concentraciones utilizadas de aceite de orégano empezaron en 4 % v/v y se redujeron hasta 0 μL/mL según lo registrado por distintos autores.

Las CMI Y CMB reportadas para las biopelículas producidas por el microorganismo .L.monocytogenes fueron de 0,06 % v/v de aceite esencial de orégano(AEO), mientras que las documentadas para el patógeno en sí, eran de 0.03 % v/v según lo expresado por Kolypetri et al.(2023). Por otro lado lo evidenciado por Guo et al.(2021) demuestra una concentración parecidas a lo reportado por el anterior autor dejando en evidencia que para la CMI de AEO es de 0,02 % ( v / v ) a 0,04 % ( v / v ) y las CMB variaron de 0,03 % ( v / v ) a 0,04 % ( v / v ), el AEO redujo la cobertura de biopelícula en la superficie de los portaobjetos de vidrio en un 62,03 % en comparación con el grupo no tratado. Mientras tanto, el tratamiento con OEO (1/8 MIC) redujo la actividad hemolítica de L. monocytogenes a 24,6 % en comparación con el control positivo.

Lo documentado por Luo et al. (2024) y da Silva et al (2012) muestran que las CMI oscilan entre 0,62 μL/mL y 0,06 μL/mL durante por un periodo de tiempo de 15 a 20 minutos .

El segundo método más utilizado es la difusión de agar. Este consiste en la incorporación de un agente antimicrobiano en el medio con cada placa que contenga una concentración diferente del agente antimicrobiano. Los inóculos pueden ser aplicados rápida y simultáneamente a las superficies de agar utilizando un aparato de replicación del inóculo. La mayoría de replicadores disponibles transfieren de 32 a 36 inóculos a cada placa. Las ventajas de las pruebas de dilución en agar incluyen la reproducibilidad de los resultados y el crecimiento satisfactorio de la mayoría de organismos no fastidiosos. (Cavalieri.,et al 2005). Los datos de este segundo método sólo demuestran la CMI mediante la medición en milímetros de los halos de inhibición que es capaz de producir el aceite esencial de orégano frente a una cepa de L. monocytogenes. Chapa.B.,2018 demuestra que a una concentración del 0,8 % v/v de un aceite de orégano que contiene 68,23 % de carvacrol se muestran halos de inhibición de 0,5 mm a 1 mm. Lo expuesto anteriormente nos indica que las concentraciones mínimas inhibitorias del AEO pueden variar según la zona de crecimiento del orégano, las condiciones

de cultivo de este y la concentración de timol y carvacrol , los cuales son los principales componentes que presentan esta actividad antimicrobiana,otro factor importante a tener en cuenta es de donde se aisló el microorganismo ya que esto puede provocar alguna resistencia bacteriana que genera un aumento en la concentración de utilizar para inhibir el patógeno.

8.2.2

Los ensayos in vitro expuestos en los artículos incluye distintos alimentos, los cuales son previamente desinfectados y en algunos casos se realizan cortes según lo especifique la metodología.Además se realiza un recuento microbiano antes de la inoculación del microorganismo para verificar que este ya no se encuentre contaminado con el patógeno.

Evaluación del aceite esencial de orégano encapsulado frente a la L.

monocytogenes Un estudio realizado con la mortadela de pavo incubada con L. monocytogenes para posterior adición del aceite de orégano encapsulado y AEO libre Según lo expresa Luo et al.(2024) , en la incubación con

L. monocytogenes y

ensayos posteriores con nanoemulsiones de AEO,provocan una disminución significativa en el crecimiento bacteriano ya que pasa de una concentración inicial de 7,18 ± 0,04 log UFC/g a 0,32 ± 0,14 y 0,48 ± 0,09 log UFC/g, esto con ayuda de dos diferentes concentraciones de AEO. En comparación Lastra- Vargas et al .(2023) hace ensayos con la mortadela de pavo incubando está a concentraciones de 10^3 a 10^4 UFC/g para posteriormente la adición de aceite de orégano encapsulado y AEO libre. Se obtuvo como resultado que el aceite esencial de

orégano tiene potencial para ser aplicado a la mortadela de pavo para controlar el crecimiento de L. monocytogenes durante 13 días a 10 °C a una concentración de 0,5 g/100 g, ya que no permitió un crecimiento mayor a 2-log 10 durante el período de almacenamiento. la encapsulación del aceite esencial por coacervación compleja y emulsificación no mejoró la eficiencia antimicrobiana del aceite, ya que no se encontraron diferencias entre la mortadela tratada con aceite esencial de orégano libre o el aceite encapsulado por cualquiera de las dos técnicas a la misma concentración de aceite esencial.

Estos resultados junto a otros expuestos en la tabla solo son una pequeña demostración de que el uso del aceite esencial de orégano en diferentes presentaciones y a distintas concentraciones puede provocar la disminución exponencial del crecimiento de la L. monocytogenes , abriendo de esta manera una posibilidad de explorar este compuesto como un inhibidor potencial de este patógeno.

Los resultados del uso de aceite esencial de orégano con el ultrasonido demostraron que el efecto sinérgico de estos logró un deterioro más rápido de la membrana celular y de esta se logró la muerte celular. Los resultados demostraron que el uso de AEO a una concentración de 0,04 y 0,06 μL/mL en combinación con el ultrasonido a una potencia de 225 vatios/cm² durante 10 minutos mató a 4,74 ± 0,06 y 6,35 ± 0,06 log UFC/mL de L. monocytogenes

8.2.3

Debido a la creciente investigación sobre el posible uso del aceite de orégano como agente antimicrobiano , varias investigaciones han expuesto la posibilidad de combinar dos metodologías de una manera sinérgica para provocar en vez de una disminución del número de colonias un efecto bactericida en esta. Es así como el autor Luo et al.(2024) & Takundwa et al. (2021), presentan una metodología en la que aparte de utilizar el AEO como su materia prima también realizan ensayos en combinación del ultrasonido (US)

para así lograr una disminución mayor del número de microorganismos. En el caso del primer autor se obtuvieron resultados prometedores ya que con el uso del AEO Y US , esté provocó un deterioro más rápido de la membrana celular y de esta se logró la muerte celular. Los resultados demostraron que el uso de AEO a una concentración de 0,04 y 0,06 μL/mL en combinación con el ultrasonido a una potencia de 225 vatios/cm² durante 10 minutos mató a 4,74 ± 0,06 y 6,35 ± 0,06 log UFC/mL de L. monocytogenes , respectivamente.Por otra parte Takundwa en sus ensayos demostró que la combinación de la nisina que es utilizada como agente conservante en diferentes alimentos, el ultrasonido y el aceite esencial de orégano en unas concentraciones de 771,2 IU/g de nisina, 0,185 % v/v de orégano y 14,65 minutos de ultrasonido, mostró una reducción logarítmica de 3,03 UFC/mL. Otras investigaciones hechas por Pavli et al.(2019) , demostraron que el uso del AEO en combinación con un procesamiento de alta presión (HPP) logra provocar la reducción significativa o la ausencia del patógeno.La incorporación de AEO en las películas, causó aproximadamente 1,5 reducción logarítmica en la población de Listeria a 8 y 12 °C al final del período de almacenamiento, y casi 2,5 reducción logarítmica a 4 °C. El tratamiento HPP causó 1 reducción logarítmica en la población inicial de Listeria.

Dando a entender de esta manera que el uso de estas metodologías puede potenciar de manera notable las posibilidades de reducir en una manera más rápida la cantidad de patógenos que se puede encontrar en los alimentos y abre un campo amplio sobre la combinación de diferentes métodos para lograr una mayor sinergia y reducción logarítmica del microorganismo.

8.2.4

Las especies reactivas del oxígeno (ROS) son producidas como una consecuencia del metabolismo aeróbico fisiológico normal. La cadena de transporte de electrones de la mitocondria, los peroxisomas, la NADPH oxidasa, la óxido nítrico sintetasa desacoplada y el sistema del citocromo P450 son las fuentes más importantes de producción de los ROS. El desbalance entre la producción de los ROS y el sistema de defensa antioxidante en los sistemas vivos ocasiona una ruptura de la función

celular y daños. Por otro lado el malondialdehído (MDA), es una especie producto de la oxidación lipídica y es considerado un marcador importante de daño celular y estrés oxidativo. Un aumento elevado en los niveles de MDA provoca un exceso en las especies reactivas de oxígeno, lo que puede llegar a dañar la membrana celular, proteínas y otros componentes fundamentales de la célula. (Carvajal Carvajal,

2019).

El efecto que tiene el tratamiento con nano emulsiones y emulsiones de AEO en la L. monocytogenes provoca el aumento de las concentraciones de MDA Y ROS. De acuerdo con Luo et al.(2024) y el ensayo que realizó con la nanoemulsiones del aceite de orégano y ultrasonido , los resultados fueron favorables ya que con una concentración de 0,04 y 0,06 μL/mL de nanoemulsion de aceite esencial de orégano los niveles de ROS aumentaron a 8900,94 ± 951,28, esto indica que se produjo una peroxidación lipídica de la membrana celular que se articula con proteínas, aminoácidos , ácidos nucleicos y otras sustancias, lo que conduce a la precipitación de compuestos insolubles y la destrucción de la estructura de la membrana celular.Así también lo demuestra Guo et al. (2021) el cual observó un aumento en las concentraciones de MDA Y ROS , luego de adicionar distintas concentraciones de aceite esencial de orégano ( (0, ¼ CMI, ½ CMI y CMI).

Con base a estas investigaciones se puede concluir que el aumento en el nivel ROS y MDA intracelular puede llegar a provocar graves daños en la pared celular de las bacterias por la oxidación masiva de lípidos y de esta manera generar la lisis celular, dando como resultado que el aumento de estos componentes debido al uso del AEO provoca un efecto bactericida.

8.2.5

Para finalizar el tema y no dejar de lado las posibles implicaciones que puede llegar a tener el AEO aplicado a productos alimenticios en cuanto a la textura, sabor y propiedades organolépticas de este, en diversos artículos se estudió este efecto ya que el orégano al ser una planta aromática que principalmente es utilizada en distintas preparaciones culinarias, el olor y sabor puede llegar a provocar un efecto desagradable en las personas que consumen alimento que contengan este activo.

Para ello se ha propuesto realizar la encapsulación del aceite esencial de orégano y así lograr una mejor biodisponibilidad durante un periodo de tiempo mucho más largo además de controlar factores como la solubilidad, pH,temperatura, oxígeno y humedad.

Cabe señalar que el uso de aceites esenciales como conservantes de alimentos todavía es limitado debido a su intenso sabor. Una metodología alternativa para minimizar los efectos sensoriales puede ser la incorporación de aceites esenciales en matrices poliméricas como películas/recubrimientos comestibles, lo que conduce a la reducción del impacto organoléptico de las sustancias, mientras que su difusión al producto se puede controlar. La incorporación de aceites esenciales en películas comestibles tiene un gran impacto en el control del crecimiento bacteriano durante el almacenamiento de carne y productos cárnicos, ya que la contaminación generalmente ocurre en la superficie de dichos productos. (Pavli et al., 2019). Algunas investigaciones afirmaron que después de la adición de AEO en distintas presentaciones, este provocó cambios en la estructura y aspecto, sin embargo otros resultados demostraron que con la sinergia de dos metodologías como el ultrasonido y la encapsulación del

AEO

no disminuye las propiedades organolépticas y sensoriales del producto ya que la concentración del aceite esencial de oregano no fue tan alta y con ayuda de otros métodos se logró un mejor resultado.

8.3 SEGURIDAD ALIMENTARIA (relación de la actividad antimicrobiana con la

mejora de la seguridad alimentaria) ver anexo 1 TABLA Caracterizacion de oregano En el contexto de la revisión bibliográfica sobre la seguridad alimentaria, el uso del aceite esencial de orégano ha demostrado tener propiedades inhibitorias frente a varios tipos de bacterias y hongos. Su eficacia ha sido evaluada en distintas etapas del proceso de producción de diversos productos alimentarios, especialmente en aquellos relacionados con la carne y el queso.

Diversos estudios han implementado la técnica de embalaje antimicrobiano utilizando aceite esencial de orégano, diseñado para inhibir o reducir el crecimiento de microorganismos. Esta técnica no solo busca prolongar la vida útil de los alimentos envasados, sino también mejorar la seguridad alimentaria al prevenir la proliferación de patógenos causantes de enfermedades. Además, esta estrategia permite establecer un periodo más largo de conservación, evitando el deterioro de los alimentos.

En particular, en el proceso de envasado, se evaluó la eficacia del aceite esencial de orégano mediante diversas técnicas para analizar su capacidad frente a bacterias. Un estudio específico demostró que el uso de este aceite redujo significativamente el crecimiento de E. coli en carne, especialmente en pavo ahumado, mejorando la calidad del producto.

Alineado con lo anterior, se desarrolló un embalaje antibacteriano para alimentos capaz de liberar de manera sostenida y unidireccional nanoemulsiones de carvacrol y timol (TH&CA NEs). El objetivo fue encapsular compuestos antimicrobianos ( aceite esencial de orégano) en nanoemulsiones para liberarlos de forma controlada, evitando así la propagación de microorganismos y la oxidación de lípidos y proteínas.

Por otro lado, se evaluó el efecto conservante del aceite esencial de orégano con el fin de prolongar la vida útil de los alimentos. Uno de los estudios revisados observó

que la adición de una pequeña proporción de este aceite a la carne molida resultó en una significativa reducción de microorganismos.

Otro aspecto importante analizado fue su capacidad para reducir la oxidación de lípidos en alimentos, especialmente en carnes. La oxidación de lípidos es una de las principales causas de deterioro en cuanto al sabor, aroma y color de estos productos.

Además, en uno de los artículos revisados, se comprobó la capacidad del aceite esencial de orégano para erradicar biofilms, comunidades de microorganismos que se adhieren a superficies y crean una capa protectora. En este caso, se evaluó su efecto sobre biofilms formados por Listeria monocytogenes. En un ensayo, se logró la erradicación de biofilms preformados aplicando una concentración de 6.25 % de aceite durante 15 minutos. Los resultados mostraron que el aceite inhibió el crecimiento de L. monocytogenes y se inhibió completamente la formación de biofilm a concentraciones de 0.06 %.

Otro hallazgo importante fue que el aceite esencial redujo significativamente la expresión de genes de virulencia (hly, inlA, inlB y prfA) en L. monocytogenes. Estos genes son responsables de causar la enfermedad listeriosis, lo que disminuye la capacidad de la bacteria para replicarse y causar infecciones. Adicionalmente, se evaluó el efecto sinérgico de una mezcla de aceites esenciales de Origanum vulgare (OVEO) y Rosmarinus officinalis (ROEO) para preservar la calidad sensorial y fisicoquímica del queso fresco durante su almacenamiento refrigerado, además de su capacidad para controlar la supervivencia de bacterias. Un estudio sobre el queso de Minas arrojó como resultados que el aceite esencial de orégano es una alternativa eficaz y natural a los conservantes sintéticos, proporcionando un control efectivo sobre microorganismos patógenos, sin comprometer las propiedades organolépticas. Esto lo convierte en una opción atractiva en la industria alimentaria, especialmente en un contexto donde los consumidores prefieren productos más naturales y con menos aditivos sintéticos.

Finalmente, por todas las propiedades mencionadas anteriormente, se puede concluir que el aceite esencial de orégano es una opción prometedora como antimicrobiano, especialmente en su uso en alimentos como conservante. En la etapa de envasado ha demostrado resultados potenciales, lo que lo convierte en una opción viable para mejorar la seguridad alimentaria. Particularmente, los estudios revisados han comprobado su poder antimicrobiano contra Listeria monocytogenes, que fue el foco de este análisis.

CONCLUSIONES

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DETERMINACIÓN DE CMB Y ENSAYOS IN VITRO

Cuando el timol y el carvacrol ingresan a la célula y liberan grupos hidroxilo (–OH), se pueden desencadenar varios procesos que conducen a un aumento en las especies reactivas de oxígeno (ERO). Aquí hay un resumen de algunos de estos procesos:

1. **Oxidación de sustratos**: La presencia de grupos hidroxilo puede facilitar

reacciones de oxidación, generando radicales libres y ERO a partir de compuestos celulares, como lípidos y proteínas.

2. **Inhibición de antioxidantes**: Si el timol y el carvacrol alteran la actividad

de enzimas antioxidantes, como la superóxido dismutasa o la glutatión peroxidasa, se puede reducir la capacidad de la célula para neutralizar las

ERO.

3. **Activación de rutas de señalización**: El aumento de ERO puede activar

vías de señalización intracelular, como la vía de NF-κB, que puede llevar a una respuesta inflamatoria o a la activación de genes que promueven el estrés oxidativo.

4. **Daño celular**: Las ERO pueden causar daño a biomoléculas, como

lípidos (lipoperoxidación), ADN y proteínas, lo que puede alterar funciones celulares y contribuir a procesos como la apoptosis o la necrosis.

5. **Efecto en la mitocondria**: Las mitocondrias son una fuente importante de

ERO. La presencia de timol y carvacrol puede afectar la función mitocondrial, aumentando la producción de ERO durante la fosforilación oxidativa. En resumen, la liberación de grupos hidroxilo por el timol y el carvacrol puede desencadenar una cascada de reacciones que aumentan las ERO y alteran la homeostasis redox de la célula, con posibles efectos tanto positivos como negativos.

El **timol** y el **carvacrol** son compuestos fenólicos presentes en aceites esenciales de diversas plantas, como el orégano, el tomillo y otras especies de la familia Lamiaceae. Ambos compuestos tienen estructuras similares, lo que les otorga propiedades químicas y biológicas parecidas, aunque presentan algunas diferencias que pueden influir en su actividad. Aquí te doy un resumen detallado de cada uno:

### **Timol (2-isopropil-5-metilfenol)** #### Estructura química:

- Fórmula molecular: **C10H14O**

- El timol es un fenol que tiene un grupo metilo (CH₃) y un grupo isopropilo

(C₃H₇) en su anillo bencénico.

#### Propiedades físicas y químicas:

- Es un líquido aceitoso, incoloro o ligeramente amarillento con un aroma

característico a hierba.

- Su punto de ebullición es de aproximadamente 232-235 °C.

- Es soluble en alcohol, éter y otros disolventes orgánicos, pero no en agua.

#### Fuentes naturales:

- Se encuentra principalmente en el aceite esencial del **tomillo** (Thymus

vulgaris) y, en menor medida, en el aceite de orégano (Origanum vulgare). #### Propiedades biológicas:

- **Antimicrobiana**: El timol tiene una acción antimicrobiana significativa,

inhibiendo el crecimiento de bacterias, hongos y virus.

- **Antioxidante**: Actúa como un antioxidante natural, protegiendo las células

del daño causado por los radicales libres.

- **Antiinflamatoria**: Tiene propiedades antiinflamatorias que pueden ser

útiles para el tratamiento de trastornos inflamatorios.

- **Analgésica**: En algunos estudios, se ha mostrado que el timol tiene un

efecto analgésico, ayudando a reducir el dolor.

#### Usos:

- Se utiliza en la industria alimentaria como conservante natural debido a sus

propiedades antimicrobianas.

- En productos cosméticos y de cuidado personal, como ungüentos o aceites,

debido a sus propiedades antibacterianas y antiinflamatorias.

-

Como componente en algunos productos farmacéuticos para tratar infecciones respiratorias o bucales.

---

### **Carvacrol (2-methyl-5-isopropylphenol)** #### Estructura química:

- Fórmula molecular: **C10H14O**

- Al igual que el timol, el carvacrol es un fenol, pero en este caso tiene un

grupo isopropilo (C₃H₇) en la posición 5 del anillo bencénico y un grupo metilo (CH₃) en la posición 2.

#### Propiedades físicas y químicas:

- Es un líquido aceitoso con un fuerte aroma a orégano.

- Su punto de ebullición es de alrededor de 230-232 °C.

- Al igual que el timol, es soluble en disolventes orgánicos, pero no en agua.

#### Fuentes naturales:

- El carvacrol se encuentra principalmente en el aceite esencial de **orégano**

(Origanum vulgare), aunque también está presente en otras plantas como el tomillo.

#### Propiedades biológicas:

- **Antimicrobiana**: El carvacrol es conocido por su potente actividad

antimicrobiana, especialmente frente a bacterias grampositivas y gramnegativas.

- **Antiinflamatoria**: Posee efectos antiinflamatorios al inhibir la liberación de

mediadores inflamatorios, lo que lo hace útil para el tratamiento de enfermedades inflamatorias.

- **Antioxidante**: Al igual que el timol, el carvacrol muestra propiedades

antioxidantes, ayudando a neutralizar los radicales libres y protegiendo las células del daño oxidativo.

-

**Antiparasitaria**:

Tiene actividad contra ciertos tipos de parásitos, especialmente en el ámbito de la medicina veterinaria.

- **Anticancerígena**: Algunos estudios sugieren que el carvacrol podría tener

propiedades anticancerígenas, al inhibir la proliferación de células tumorales en ciertos tipos de cáncer.

#### Usos:

- Al igual que el timol, se utiliza en la industria alimentaria como conservante

natural debido a sus propiedades antimicrobianas.

-

En productos cosméticos y farmacéuticos, especialmente para tratar infecciones o problemas respiratorios.

- En algunos remedios naturales, el carvacrol se usa como antiinflamatorio y

analgésico.

---

### **Similitudes y diferencias entre timol y carvacrol:** #### Similitudes:

1. Ambos son fenoles y comparten una estructura química muy similar.

2.

Ambos tienen propiedades antimicrobianas, antioxidantes y antiinflamatorias.

3. Se encuentran en aceites esenciales de plantas como el orégano y el

tomillo, y tienen un amplio uso en la medicina tradicional y moderna.

4. Se utilizan en la industria alimentaria, cosmética y farmacéutica por sus

propiedades conservantes y terapéuticas.

#### Diferencias:

1. **Grupo metilo e isopropilo**: Aunque ambas moléculas contienen un anillo

bencénico, el timol tiene un grupo metilo en la posición 5 y un grupo isopropilo en la posición 2, mientras que el carvacrol tiene un grupo metilo en la posición 2 y un grupo isopropilo en la posición 5. Esto influye en las propiedades organolépticas (olor, sabor) y algunas actividades biológicas.

2. **Distribución en plantas**: El carvacrol es más comúnmente asociado con

el aceite de orégano, mientras que el timol se encuentra principalmente en el aceite de tomillo.

3.

**Potencia antimicrobiana**:

Aunque ambos compuestos tienen propiedades antimicrobianas, algunas investigaciones sugieren que el carvacrol puede ser ligeramente más efectivo frente a ciertas bacterias.

---

### **Resumen:**

- El **timol** y el **carvacrol** son compuestos fenólicos presentes en aceites

esenciales de plantas como el tomillo y el orégano, conocidos por sus propiedades antimicrobianas, antiinflamatorias, antioxidantes y potencialmente anticancerígenas.

- Se utilizan en una amplia variedad de aplicaciones, desde la conservación de

alimentos hasta el tratamiento de afecciones respiratorias y la elaboración de productos cosméticos.

- A pesar de sus similitudes estructurales y propiedades, el carvacrol tiene

una distribución más frecuente en el orégano, mientras que el timol se encuentra principalmente en el tomillo.

Ambos compuestos son ejemplos de cómo las plantas pueden ser fuente de moléculas con actividad biológica significativa, y su investigación continúa ofreciendo nuevas aplicaciones terapéuticas.