Biología Aplicada · 2022
Reconocimiento de miRNAs y su relación con la expresión de genes de clavel (Dianthus caryophyllus) involucrados en la respuesta al patógeno Fusarium oxysporum f. sp. dianthi
La producción de clavel a nivel mundial sufre grandes pérdidas por el marchitamiento vascular causado por el patógeno Fod (Fusarium oxysporum f. sp. dianthi). Por lo que Los trabajos relacionados con el mecanismo de respuesta de variedades naturalmente resistentes, podría ser el primer paso para la producción de variedades comerciales resistentes a Fod. En este estudio se fabricaron librerías de miRNA de dos variedades. 395 resistente y SH2 susceptible a Fod, en dos tratamientos: antes de la elicitación y después de la elicitación. Se encontraron miRNAs putativos que regulan la expresión de alguno de los 35 genes muestra. Estos genes muestran variaciones importantes en sus niveles de expresión durante la elicitación con Fod. Esto se determinó en trabajos anteriores en el laboratorio de Biotecnología vegetal de la Universidad Militar Nueva Granada. Estos miRNAs fueron validados y su perfil de control postranscripcional fue relacionado con el mecanismo de respuesta de ambas variedades. Se encontró que ambas variedades responden mediante el mismo perfil de control postranscripcional y tienen un mecanismo de respuesta similar. Sin embargo, 395 controla postranscripcionalmente los genes adecuados en el momento oportuno para responder de manera efectiva. Mientras que SH2 no tiene esa misma eficiencia, lo que no le permite ser oportuno en la respuesta ante Fod. Se proponen 84 miRNAs putativos en total que están controlando los mecanismos de expresión de 26 de los 35 genes al momento de la elicitación. Realizar experimentos de “Knock out” o “Knock down” sobre estos 84 miRNAs podría mostrar perdida o ganancia de resistencia a Fod, lo que permitiría concluir que estos miRNAs son claves para el mecanismo de respuesta de variedades resistentes de clavel ante Fod.
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Contenido
- Lista de figurasp. 5
- Lista de tablasp. 6
- Agradecimientosp. 7
- Capítulo I: Revisión bibliográficap. 8
- Fusarium oxysporump. 8
- Dianthus caryophyllusp. 9
- Interacción planta-patógenop. 10
- miRNAp. 11
- Transcripción de los genes MIRp. 12
- Procesamientop. 13
- Relación entre miRNAs y mRNAsp. 14
- siRNAsp. 66
- Librerías genómicasp. 16
- NGSp. 17
- Objetivos del trabajop. 18
- Capítulo II: Trabajo de gradop. 19
- Resumenp. 20
- Abstractp. 21
- Introducciónp. 22
- Métodosp. 22
- Resultados y análisisp. 35
- Discusiónp. 51
- Conclusionesp. 57
- Literatura citadap. 58
- Anexosp. 68
- 1. Células indiferenciadas de clavelp. 23
- 2. Procedimiento para cultivo monospóricop. 25
- 3. Reconocimiento de estructuras de Fodp. 26
- 4. Ensayos duales clavel-Fodp. 27
- 5. Salida del software miRDeep2p. 31
- 6. Crecimiento de Fod en presencia de callos de clavelp. 36
- 7. “novel miRNA” conservados e híbridosp. 39
- 8. Expresión diferencial de miRNAs conservadosp. 40
- 9. Composición de genes “target” entre variedades y tratamientosp. 41
- 10. Perfil de control postranscripcional de genes por categoríap. 41
- 13. Mapa ilustrativo del mecanismo de control postranscripcional (395)p. 46
- 14. Mapa ilustrativo del mecanismo de control postranscripcional (SH2)p. 47
- 1. Validación de híbridos (SH2)p. 64
- 2. Validación de híbridos (395)p. 66
- 1. Información general de los genes usados en el presente estudiop. 33
- 2. Estadísticas generales de las librerías usadas en este estudiop. 36