Bogotá - Ciencias Agrarias - Maestría en Ciencias Agrarias · 2026
Caracterización de Dematophora spp. y desarrollo de una técnica isotérmica LAMP para el diagnóstico de Ceratocystis sp. y Dematophora sp. en cacao (Theobroma cacao L.)
El mal del machete o marchitamiento vascular causado por Ceratocystis cacaofunesta y la pudrición negra de la raíz por Dematophora spp. (sin. Rosellinia spp.), se han convertido en enfermedades de gran relevancia en los cultivos de cacao (Theobroma cacao L.), ya que la sintomatología se manifiesta típicamente en etapas avanzadas de la infección. Pese a su importancia, en Colombia se tienen escasos estudios de caracterización de aislamientos de Dematophora sp. asociados al cacao. Esto limita la comprensión de su diversidad y dificulta el desarrollo de métodos diagnósticos específicos. A esto se suma la escasez de técnicas de detección temprana de estos dos patógenos, lo que conlleva a emplear procedimientos tradicionales que demandan tiempos prolongados y equipos especializados de alto costo. Debido a ello, las herramientas moleculares como la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) podría utilizarse como un método rápido y sensible de diagnóstico, incluso en material vegetal asintomático. Por ende, esta investigación tuvo como objetivo caracterizar aislamientos de Dematophora sp. y diseñar una prueba LAMP para la detección temprana de Ceratocystis sp. y Dematophora sp. en cacao. Se realizó la caracterización de 17 aislamientos de Dematophora sp. provenientes de cuatro regiones cacaoteras de Colombia. A nivel morfológico se evaluaron características macro y microscópicas y se hizo un análisis de componentes principales y factorial de datos mixtos para hacer agrupaciones. A nivel molecular se hizo un análisis filogenético multilocus usando las regiones ITS y LSU y los genes βT y RPBII para identificar los aislamientos a nivel de especie. Posteriormente, se realizó el diseño de cebadores LAMP para la detección de Ceratocystis sp. y Dematophora sp., determinando la especificidad y sensibilidad de la prueba. Se realizaron pruebas de patogenicidad de C. cacaofunesta y Dematophora spp. en plántulas susceptibles de cacao CNN-51 e IMC-67 respectivamente. Como resultados, con el análisis de las características morfológicas de los aislamientos de Dematophora sp. se obtuvieron cinco grupos morfológicos contrastantes. A nivel molecular se encontró que doce de los aislamientos se identifican como Dematophora pepo. Con la estandarización de la prueba LAMP se logró realizar la detección temprana de Ceratocystis sp. y Dematophora sp. en plántulas de cacao, con un límite de detección de 0,005 ng/µL y 0,0005 ng/µL respectivamente, siendo 1000 veces más sensible que una PCR de punto final. Con este estudio se aportan nuevos conocimientos a nivel morfológico, molecular y epidemiológico de las especies del género Dematophora que afectan al cacao en Colombia, al igual que nuevas herramientas de detección molecular isotérmicas para el diagnóstico temprano de patógenos vasculares y radicales de cacao. (Texto tomado de la fuente)
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Contenido
- (sin. Rosellinia spp.)p. 24
- Introducciónp. 17
- Materiales y métodosp. 28
- 1.2.1 Localizaciónp. 28
- 1.2.2 Colección de aislamientosp. 28
- 1.2.3 Caracterización morfológicap. 29
- 1.2.4 Análisis estadísticop. 30
- 1.2.5 Caracterización molecularp. 31
- Extracción de ADNp. 31
- Amplificación por PCRp. 32
- Análisis filogenéticop. 34
- Resultadosp. 35
- Discusiónp. 52
- Conclusionesp. 57
- Ceratocystis sp. y Dematophora sp. en cacaop. 58
- Introducciónp. 17
- Materiales y métodos:p. 60
- 2.2.1 Colección de aislamientosp. 28
- 2.2.2 Diseño de cebadores LAMPp. 60
- 2.2.3 Reacciones LAMPp. 61
- 2.2.4 Estandarización de la prueba diagnóstica LAMPp. 62
- 2.2.5 Pruebas de sensibilidad LAMP y PCRp. 62
- 2.2.6 Pruebas de patogenicidadp. 63
- 2.2.7 Análisis estadísticop. 30
- 2.2.8 Extracción de ADN a partir de tallos y raíces de cacaop. 64
- 2.2.9 Confirmación de la prueba diagnóstica LAMPp. 65
- Resultadosp. 35
- 2.3.1 Estandarización de la prueba diagnóstica LAMPp. 62
- 2.3.2 Pruebas de patogenicidadp. 63
- vegetal infectadop. 78
- Discusiónp. 52
- Conclusionesp. 57
- Discusión generalp. 87
- Conclusiones y recomendacionesp. 89
- Figuras y tablas suplementariasp. 93
- Bibliografíap. 108
- M2; c) M3; d) M4, e) M5p. 36
- significativas entre tratamientos (p < 0.05)p. 39
- de 90 mm)p. 41
- Magnificación de 100xp. 41
- hinchamiento piriforme; LHP: Largo del hinchamiento piriformep. 44
- del hinchamiento piriformep. 45
- DNA Marker Nippon Geneticsp. 47
- Graphostroma platystoma para el outgroupp. 50
- del análisis filogenético multilocusp. 51
- detección de Dematophora spp. 67
- GREEN I (520 nm). c) Pico de fusión a partir de la curva de disociaciónp. 68
- GREEN I (520 nm). c) Pico de fusión a partir de la curva de disociaciónp. 68
- final de la región LSU (28S) bajo electroforesis en gel de agarosa al 2%p. 70
- Marchitamiento, defoliación y muerte de la plantap. 71
- ddi: Días después de inoculaciónp. 72
- cacaofunestap. 60
- los aislamientos NCF47 y NCF36 de C. cacaofunestap. 74
- tiempo; ddi: Días después de inoculaciónp. 75
- Ros010 (Dematophora sp.)p. 76
- siembra (ddi). a) Planta Testigo; b) Aislamiento Ros009; c) Aislamiento Ros010p. 77
- Ros009 de D. pepo y Ros010 de Dematophora spp. 78
- agarosa al 3% (abajo); PI: Planta inoculada C. cacaofunesta.; PT: Planta testigop. 78
- agarosa al 3% (abajo); PI: Planta inoculada Dematophora pepo.; PT: Planta testigop. 79
- MEAA para los aislamientos de Dematophora sp. evaluadosp. 93
- PDAA para los aislamientos de Dematophora sp. evaluadosp. 94
- Dematophora sp. en medio de cultivo MEAA y PDAA incubados a 24+2 °Cp. 95
- análisis de componentes principales (PCA)p. 97
- análisis de datos mixtos (FAMD)p. 97
- outgroupp. 98
- outgroupp. 98
- secuencias de Graphostroma platystoma para el outgroupp. 100
- Se uso las secuencias de Graphostroma platystoma para el outgroupp. 101
- productoras de cacao en Colombia, utilizados en este estudiop. 28
- de aislamientos de Dematophora spp. 33
- Dematophora spp. 34
- (A)=Antioquia; (C)=Caldas; (R)=Risaraldap. 36
- sp. Letras distintas indican diferencias significativas entre tratamientos (p < 0.05)p. 42
- secuenciación Sangerp. 48
- secuenciación Sanger (continuación)p. 49
- estudiop. 60
- cultivo, incluyendo error estándar (EE) e intervalos de confianza al 95% (IC95%)p. 102
- estándar (EE) e intervalos de confianza al 95% (IC95%)p. 103
- criterios de información (AIC, BIC y log-likelihood)p. 103
- de ARS-USDA modificadop. 104
- la técnica LAMP para la detección de Ceratocystis sp. y Dematophora sp. en cacaop. 105
- tratamiento; GC=Grupo comparaciónp. 109
- modificado. PI=Planta inoculada; PT=Planta testigop. 107