Bacteriología y Laboratorio Clínico · 2018
Modelo de infección de células hep-2 con Chlamydia Trachomatis Serovar l2 (eb’s/lgv vr-902b) y su aplicación en investigación.
Chlamydia trachomatis es una bacteria Gram negativa, intracelular obligada caracterizada por causar infección únicamente en humanos (tanto hombres como mujeres) y estar relacionada con enfermedades de transmisión sexual e infecciones oculares, por lo que puede conllevar a secuelas de interés si no se da un tratamiento oportuno. Por lo anterior, Chlamydia trachomatis es un microorganismo importante de estudio; a través del siguiente proyecto se estableció el modelo de infección de células HEp-2 con cuerpos elementales (EB’s) de C. trachomatis serovar L2 por medio de cultivo celular, donde se instauró las condiciones para el crecimiento adecuado de las células en un tiempo y con una confluencia determinada, para ser empleadas en los diferentes ensayos, efectuándose un protocolo de infección y siendo demostrado a partir de la coloración de Giemsa permitiendo evaluar características morfológicas tanto de las células HEp-2 sin infectar e infectadas y así mismo de los cuerpos elementales de Chlamydia trachomatis y finalmente aplicando la técnica de Inmunofluorescencia Directa para la detección de la proteína de membrana MOMP de Chlamydia trachomatis. Tras los ensayos llevados a cabo se determinó la densidad celular necesaria para obtener una confluencia del 90% y poder realizar la infección, la cual se evidenció con presencia de cuerpos elementales próximos y dentro del citoplasma celular, vacuolas y además un notorio daño celular luego de la infección. Este proyecto servirá como modelo de investigación para ser aplicado en diferentes campos científicos.
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Contenido
- INTRODUCCIÓNp. 11
- OBJETIVOSp. 13
- 1.1. Objetivo generalp. 13
- 1.2. Objetivos específicosp. 13
- ANTECEDENTESp. 14
- MARCO TEORICOp. 18
- Líneas celulares como modelo de investigación celularp. 18
- Cultivo celularp. 18
- Ventajas del Cultivo Celularp. 19
- 3.2.2 Desventajasp. 20
- Línea celular HEp-2p. 21
- Chlamydia trachomatisp. 22
- Ciclo de Vidap. 24
- Interacción huésped – parásitop. 25
- Transmisiónp. 26
- Factores de riesgop. 27
- Enfermedades relacionadasp. 27
- Presentación clínicap. 28
- 3.4.7. Prevalencia en Colombiap. 29
- 3.4.8 Diagnóstico y tratamiento convencional para Chlamydia trachomatisp. 30
- 3.5. Chlamydia trachomatis serovar L2p. 31
- 3.6 ATCC (EB’s/ LGV - L2 VR 902B)p. 32
- 3.7 Aplicaciones del modelo de investigación con Chlamydia trachomatisp. 32
- 4. DISEÑO METODOLÓGICOp. 37
- 4.1. Tipo y enfoque de la investigaciónp. 37
- 4.2. Universo, población y muestrap. 37
- 4.3. Hipótesisp. 37
- 4.4 Procedimientos y técnicasp. 37
- 4.4.1 Establecimiento del cultivo de la línea celular HEp-2p. 38
- 4.4.2 Infección de células HEp-2 con Chlamydia trachomatisp. 43
- 4.4.3 Protocolo de la infecciónp. 44
- Evaluación estadística de los datos obtenidosp. 51
- RESULTADOSp. 52
- 5.1 Cultivo de la línea celular HEp-2p. 52
- 5.2 Coloración de Giemsap. 57
- 5.3 Infección de células HEp-2 con Chlamydia trachomatisp. 43
- 5.3.1 Determinación de la concentración celularp. 60
- 5.3.2 Infección de las células Hep2p. 64
- 5.3.3 Inmunofluorescencia directap. 50
- DISCUSIÓNp. 76
- CONCLUSIONESp. 83
- REFERENCIASp. 84
- trachomatis. (Fuente: Revista NOVA. 2003)p. 23
- Desenmascarando a las ITS. 2014)p. 25
- periodo 2009-2015p. 30
- en las células infectadas tomado de (Fuente: Cell Host & Microbe 2017)p. 34
- pSTAT1 en células pretratadas con IFNγ. (Fuente: Scientific Reports. 2018)p. 34
- infección (Fuente: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2017)p. 35
- viabilidad celular (Tomada por las autoras)p. 39
- (Tomado por las autoras)p. 41
- microscopio óptico (Tomado por las autoras)p. 42
- Hanks) (Tomado por las autoras)p. 45
- visualizadas tras 48 h.p.ip. 47
- EB’s visualizadas tras 24 h.p.i y 48 h.p.ip. 47
- muertas encontradas en la preparación (Tomadas por las autoras)p. 52
- de las células HEp-2 sembradas (Tomadas por las autoras)p. 54
- confluencia del 90% (Tomadas por las autoras)p. 54
- parte de solución madrep. 57
- autoras)p. 58
- Células HEp-2 en aumento de 40x, distintos camposp. 58
- 8: Controles negativosp. 60
- invertidop. 61
- celular entre 50,000 y 60,000 células. Pozo 1 y 8: Controles negativosp. 62
- de 60.000 células con una confluencia del 80%p. 63
- cada campop. 64
- elemental (demarcado en color azul) con su forma ovoidep. 65
- 20 uL de EB’s. (D). 40 uL de EB’sp. 66
- negativo) observado en objetivo de 40Xp. 67
- 40Xp. 69
- observadas en objetivo de 100x vacuoladas. (D). Células apoptóticasp. 69
- elementales cercanos a las células infectadas con C. trachomatisp. 70
- ausencia de fluorescencia por parte del Anticuerpo ab21211 en las célulasp. 72
- citoplasmas celulares, demostrando su infecciónp. 72
- con 40uL de cuerpos elementalesp. 73
- elementalesp. 74
- genética, inmunología y terapiap. 81
- diferentes serovaresp. 32
- Tabla 2. Características específicas de la cepa ATCC VR -902Bp. 32
- 100% utilizado para fijar las células (Tomado por las autoras)p. 41
- Tabla 4. Preparación de SPG (Sucrose-Phosphate-Glutamate)p. 46
- Tabla 5. Preparación de HBSS (Solución salina equilibrada de Hanks)p. 46
- Tabla 6. Concentración en uL de células en suspensión a adicionar por pozop. 61
- concentracionesp. 66
- Tabla 8. Rango aproximado de EB's en 50,000 células por pozop. 67
- (Eje X)p. 62
- celular (Eje X)p. 61