Bacteriología y Laboratorio Clínico · 2025
Identificación de trampas extracelulares de neutrófilos-nets en pacientes con síndrome post-covid
Los neutrófilos desempeñan un papel crucial en la respuesta inmunitaria innata contra patógenos. Esta célula reconoce patrones moleculares asociados a patógenos (PAMps) o daño celular (DAMPs). Como mecanismos de defensa emplea la fagocitosis, la liberación de especies reactivas de oxígeno (ROS), la liberación de trampas extracelulares de neutrófilos (NETs) entre otros mecanismos. La NETosis, es un proceso de muerte celular programada que implica la liberación del ADN celular, histonas y proteínas antimicrobianas como la Mieloperoxidasa (MPO) y la elastasa neutrofílica al espacio extracelular con el fin de contribuir a la defensa del hospedero. Sin embargo, se ha asociado con patologías inflamatorias como el COVID-Agudo y el Síndrome post-COVID (SPC). Este estudio descriptivo longitudinal comparó tres grupos de pacientes, clasificados como COVID-19 agudo (n=35), SPC (n=35) y controles pre-pandémicos (n=35). Se analizaron específicamente los niveles séricos de complejos MPO-ADN (considerados como un marcador de NETs) mediante ELISA y la capacidad inductora de NETs del suero de cada grupo en neutrófilos sanos in vitro. Los resultados mostraron que tanto los pacientes con COVID-19 agudo como aquellos en fase de SPC presentaron niveles significativamente más elevados de complejos MPO-ADN en comparación con los controles pre-pandémicos (p<0,05), sin diferencias significativas entre las fases aguda y post-COVID de los mismos pacientes. Adicionalmente, el suero de pacientes con SPC demostró una mayor capacidad inductora de NETosis ex vivo en comparación con los controles pre-pandémicos, mientras que, en relación con su fase aguda de COVID-19, se observó una tendencia al aumento que no alcanzó significancia estadística.
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Contenido
- RESUMENp. 8
- INTRODUCCIÓNp. 10
- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMAp. 10
- 1.1 Pregunta Problemap. 11
- JUSTIFICACIÓNp. 11
- OBJETIVOSp. 12
- 3.1 Objetivo Generalp. 12
- 3.2 Objetivos Específicosp. 12
- ANTECEDENTESp. 13
- MARCO TEÓRICOp. 17
- NETs y NETosisp. 17
- SARS-CoV-2p. 20
- 5.3 COVID-19p. 23
- Síndrome Post-COVIDp. 24
- METODOLOGÍAp. 26
- 6.1 Tipo de investigaciónp. 26
- 6.2 Enfoque de la investigaciónp. 26
- 6.3 Población y muestrap. 26
- 6.4 Selección de muestrasp. 27
- 6.5 Muestras biológicasp. 28
- 6.6 Hipótesisp. 28
- 6.7Variablesp. 29
- 6.8 Análisis estadísticop. 29
- RESULTADOSp. 30
- 7.1 Protocolo de estandarización: Purificación de neutrófilos humanosp. 30
- NETs)p. 34
- 7.3 Cuantificación de complejos MPO-ADN a través de ELISAp. 35
- 7.4 Inducción de NETosis in vitro e identificación por IFIp. 37
- 7.6 Características clínicas de los pacientesp. 39
- sanos pre-pandémicosp. 40
- CONCLUSIÓNp. 46
- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICASp. 47
- 11.Anexosp. 52
- 11.1Protocolo de aislamiento de neutrófilos por gradiente- Proyecto NETs CREAp. 52
- 11.2Stock de NETs para control de ELISAp. 60
- 11.3Protocolo para el montaje de Elisa MPO-ADN/PODp. 64
- CREAp. 57
- 11.5 Protocolo para Inmunofluorescencia para NETs – Proyecto NETOSISp. 80
- 11.6 Características sociodemográficas y clínicas de los pacientesp. 89
- 11.7 Fotografías de Inmunofluorescencia indirectap. 93
- 11.8 Comité de ética en investigación de la universidad del Rosariop. 94