Biología · 2025
Efecto de fármacos sobre algunos factores de virulencia y la expresión de genes asociados al Quorum Sensing de Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa es un patógeno de preocupación mundial debido a su alta resistencia a antibióticos de última generación. Su patogenicidad está mediada por el sistema de comunicación intercelular quorum sensing (QS) que regula la virulencia y la formación de biopelículas. En consecuencia, se hace necesario identificar nuevas moléculas inhibidoras del QS y de la virulencia bacteriana, en donde el reposicionamiento de fármacos se considera como una forma eficaz y rápida de desarrollar nuevos usos terapéuticos para medicamentos comerciales. En este estudio el objetivo fue evaluar el efecto de cinco fármacos en concentraciones subinhibitorias (previamente seleccionados mediante docking molecular), sobre la formación de biopelículas por medio de la técnica de tinción con cristal violeta, la producción de factores de virulencia (elastasas, piocianina y proteasas) y la expresión de los genes del QS de P. aeruginosa (PAO1), en donde los fármacos que presentaron valores de formación de biopelículas inferiores al 50% fueron evaluados en la expresión de los genes del QS lasR, rhlR y mvfR. mediante RT-PCR semicuantitativa.
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Contenido
- RESUMENp. 10
- INTRODUCCIÓNp. 12
- PREGUNTA DE INVESTIGACIÓNp. 25
- OBJETIVOSp. 25
- Objetivo generalp. 25
- Objetivos específicosp. 25
- MATERIALES Y MÉTODOSp. 26
- Cepa bacteriana y condiciones de crecimientop. 26
- Preparación de los compuestosp. 26
- Cuantificación de la capacidad para la formación de biopelículasp. 27
- Ensayo de factores de virulenciap. 29
- Ensayo de Elastina Rojo Congop. 30
- Ensayo de proteasasp. 30
- Ensayo de piocianinap. 31
- Evaluación sobre la expresión de los genes lasR, rhlR y mvfRp. 31
- Extracción de ARNp. 31
- Síntesis de ADN monocatenarío cDNAp. 33
- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)p. 33
- Electroforesis en gel de agarosap. 35
- Análisis mediante densidad relativap. 35
- Análisis estadísticosp. 36
- RESULTADOSp. 37
- Efecto en la formación de biopelículas de P. aeruginosa por los fármacosp. 37
- Expresión génica de lasR, rhlR y mvfR frente a los compuestos evaluadosp. 40
- DISCUSIÓNp. 45
- CONCLUSIONESp. 54
- BIBLIOGRAFÍAp. 55
- ANEXOSp. 68
- fase exponencialp. 68
- negativos (con DMSO únicamente) y controles positivos (DNA de P. aeruginosa)p. 69
- Figura 1. Red jerárquica de detección de quórum (QS) en P. aeruginosap. 16
- Figura 2. Ciclo de desarrollo de las biopelículas de P. aeruginosap. 19
- Figura 3. Esquema de la regulación de la formación de biopelículas en P. aeruginosap. 20
- comparación con el control positivo (DMSO 1% y bacteria)p. 39
- realizó RT-PCR semicuantitativa como se describióp. 43
- Tabla 1. Fármacos comerciales seleccionados mediante acoplamiento molecularp. 27
- Tabla 2. Lista de genes diana con sus respectivos Forward y Reverse primersp. 34
- Tabla 3. Parámetros en el termociclador para la amplificación de la PCR convencionalp. 34
- absorbancia 260/280p. 41
- Pseudomonas aeruginosap. 44