Biología · 2025
Producción de proteína N recombinante de SARS Cov-2 para el desarrollo de una prueba serológica
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Resumen
La pandemia de COVID 19 fue ocasionada por un Beta-coronavirus que produce el Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SARS-CoV-2), su cápside está constituida por cuatro proteínas estructurales, la proteína membrana (M), la proteína de la nucleocápside (N), la glicoproteína Spike (S) y la proteína de pequeña envoltura (E). El sistema inmunológico genera respuesta de anticuerpos principalmente contra las proteínas N y S; por lo tanto, la mayoría de las pruebas serológicas utilizan versiones recombinantes de estas proteínas. Objetivo: Desarrollar una prueba serológica en formato ELISA para la detección de anticuerpos IgM e IgG contra la proteína N del virus SARS-CoV-2, mediante la producción y evaluación antigénica de proteína N recombinante. Materiales y métodos: Inicialmente se realizó la transformación de células E coli BL21 con el vector pET-28a(+) que contiene el gen que codifica para la proteína N de SARS-Cov-2. Una vez purificada la proteína, se procedió a evaluar su estabilidad y antigenicidad mediante la técnica de Western blot y un ensayo inmunoenzimático (ELISA), midiendo los parámetros: límite de detección instrumental (LDI), patrón casi cero (PCC), Intervalo lineal del método (ILM), precisión, exactitud y punto de corte. Resultados: se obtuvo una proteína de 46 KDa con buena detección por suero de pacientes sintomáticos y asintomáticos con prueba RT-PCR-positiva para SARS-CoV-2, y no reactiva a sueros prepandémicos. En la estandarización del ELISA se obtuvo un LDI: 3,9 RLU, PCC: 2,2 RLU, porcentaje de error menor al 5,5%; CV: 5,6. El punto de corte fue a 354,3 RLU. La precisión y la exactitud del test mostró un CV menor de 20 para la mayoría de las muestras. Conclusiones: La proteína N recombinante del SARS-CoV2 producida es estable, tiene buena antigenicidad, no reacciona con sueros negativos ni prepandémicos, siendo adecuada para el desarrollo de pruebas serológicas para detección a bajo costo de anticuerpos contra el virus SARS-CoV-2, con una buena repetibilidad y reproducibilidad.