Doctorado en Ciencias Biomédicas · 2019
Efecto de la suplementación con micronutrientes antioxidantes durante el embarazo, sobre el estrés oxidativo, la función vascular y modificaciones epigenéticas.
La función vascular materna es considerada un factor crítico para el apropiado desarrollo del embarazo y el feto, esta función puede ser modificada por medio de estados de estrés oxidativo que pide cambiar el funcionamiento del endotelio. Estudios observacionales durante embarazos normales han reportado un incremento fisiológico de varios biomarcadores de estrés oxidativo, sin embargo el exceso de radicales libres de oxigeno también ha sido relacionado con difusión endotelial materna, disminución de la actividad del Óxido nítrico (NO.) y alteraciones en el desarrollo fetal. Estudios recientes han mostrado que el desarrollo durante el embarazo de condiciones asociadas con estrés oxidativo intrauterino pide aumenta el riesgo para presentar enfermedades crónicas como las enfermedades cardiovasculares (ECV) durante la etapa adulta. Dentro de los mecanismos propuestos para explicar este hallazgo, se ha sugerido que adaptaciones epigéneticas intrauterinas como la metilación de citosinas y/o cambios en la expresión de ARNs largos no codificantes podrían estar involucrados. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del consumo de un suplemento con micronutrientes antioxidantes durante la gestación sobre la función vascular materna y neonata, así como estudiar su efecto sobre cambios epigéneticos con la metilación de promotores y expresión de ARNs largos no codificantes en placenta.
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Contenido
- RESUMENp. 15
- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIONp. 17
- HIPOTESISp. 19
- OBJETIVOS GENERALESp. 20
- OBJETIVOS ESPECIFICOSp. 21
- MARCO TEÓRICOp. 22
- Funcion endotelial y adipoquinas durante el embarazop. 25
- Estrés oxidativo durante el embarazop. 27
- Micronutrientes antioxidantes durante la gestaciónp. 29
- Estrés oxidativo y patrones epigenéticos in úterop. 31
- Programacion intrauterina y ARNs largos no codificantesp. 37
- Racionalidad en el desarrollo de un suplemento con micronutrientes antioxidantesp. 39
- DISEÑO METODOLOGICOp. 43
- Población y muestra:p. 43
- Tipo de estudiop. 43
- Tamaño de muestrap. 44
- Diseño del estudiop. 44
- Consideraciones Éticasp. 44
- Diseño y estabilidad del suplemento con antioxidantesp. 45
- Proceso de captación de las participantesp. 45
- Criterios de inclusiónp. 45
- Criterios de exclusiónp. 46
- Aleatorización y enmascaramiento de las primigestantesp. 47
- Grupos del estudiop. 47
- Seguimiento de las gestantesp. 48
- Toma de muestrasp. 48
- Variables resultado (Independientes)p. 48
- Covariables:p. 49
- Evaluación nutricional y medidas antropométricas maternasp. 49
- Antropometría neonatalp. 50
- Toma de tensión arterialp. 50
- Muestras de sangrep. 50
- Muestra de cordón umbilicalp. 50
- Evaluación de la función endotelial maternap. 50
- Determinación por HPLC concentración de malondialdehido en plasmap. 51
- Proteína C reactiva de alta sensibilidadp. 53
- Determinación de los niveles de adiponectina y leptina plasmáticap. 53
- Extracción de células endoteliales de vena de cordón umbilicalp. 54
- Cultivo de las células endotelialesp. 55
- Determinación de óxido nítrico (NO•) en cultivop. 55
- Cuantificación de proteínas en células endotelialesp. 56
- Nivel de expresión de eNOS y ARG2p. 56
- Inmunofluorecencia para Nrf2, PGC1A y CD31p. 57
- Extracción del ADN de placentap. 60
- Determinación de la metilación en ADN placentariop. 60
- Extracción ARN de placentap. 64
- Diseño de primers para RT-PCRp. 64
- RT-PCR para ARNs largos no codificantes (lncRNAs)p. 65
- Análisis estadísticop. 66
- ADHERENCIA AL TRATAMIENTOp. 67
- Análisis de la Aleatorizaciónp. 67
- Análisis de la deserción experimentalp. 70
- Análisis de la adherencia al tratamientop. 70
- SOBRE LA FUNCION ENDOTELIAL MATERNAp. 73
- SOBRE LA LOS NIVELES DE MALONDIALDEHIDO EN PLASMA MATERNOp. 80
- SOBRE LA LOS NIVELES DE LEPTINA, ADIPONECTINAp. 85
- SOBRE LA FUNCION ENDOTELIAL NEONATALp. 92
- Expresión proteíca de eNOS y ARG2p. 93
- Determinación del anión superoxidop. 94
- Expresión proteíca de PGC1A y Nrf2p. 96
- REGIONES PROMOTORAS RELACIONADAS CON ANGIOGENESIS EN PLACENTAp. 99
- Expresión de ARNs largos no codificantesp. 99
- Metilación de genes relacionados con angiogénesis en placentap. 103
- SOBRE EL ESTRÉS OXIDATIVO Y MEDICIONES ANTROPOMETRICAS NEONATALESp. 107
- REFERENCIASp. 117
- 2-OH-E+p. 59
- Tabla 2. Listado de genes evaluados mediante el EpiTect Methyl II PCR System…………………p. 61
- Tabla 3. Volúmenes para digestión del ADN con las enzimas de restricciónp. 61
- Tabla 4. Cebadores para RT-PCRp. 65
- Tabla 5. Parámetros antropométricos y hemodinámicos basales de las primigestantesp. 68
- Tabla 6. Consumo de nutrientes de las embarazadas al inicio del estudiop. 69
- Tabla 7. Análisis de la adherencia al tratamientop. 71
- Tabla 8. Adherencia al tratamiento por percentilesp. 71
- Tabla 9. Análisis por intención de tratamiento de la VMFp. 74
- Tabla 10. Parámetros antropométricos y hemodinámicos maternos post intervenciónp. 75
- VMFn post-intervenciónp. 77
- Tabla 12. Concentración de MDA en plasma maternop. 82
- maternasp. 84
- y grupo suplementado con antioxidantesp. 85
- bioquímicas maternas en el grupo control y el grupo suplementado con antioxidantesp. 87
- (28-32) con variables antropométricas, de función endotelial y bioquímicas maternasp. 90
- Tabla 17. Porcentaje de metilación en regiones promotoras en placentap. 103
- placentariasp. 109
- Tabla 20. Indicadores de antropometría fetal por gruposp. 109
- Tabla 21. Indicadores de antropometría fetal por grupos y sexo del recien nacidop. 110
- Figura 1. Biomarcadores de estrés oxidativo durante el embarazo y el post-parto normalp. 28
- patrones de metilación establecidos en el ADNp. 33
- Figura 3. Influencia del estrés oxidativo sobre la vías de síntesis de la SAMp. 35
- Figura 4. Mapa de las comunas de la ciudad de Santiago de Calip. 43
- Figura 5. Formación del naftodiazepinium a pH acidop. 51
- Figura 8. Esquema de placa del PCR arrayp. 62
- Figura 10. Comparación intra e intergrupos de la VMF antes y después de las intervencionesp. 76
- Figura 11. Cuantificacion del MDA total en plasma materno por HPLCp. 81
- la intervención con antioxidantesp. 82
- Figura 13. Niveles plasmáticos de adipoquinas en plasma maternop. 86
- Figura 14. Determinación de NO• en células endoteliales por HPLCp. 93
- Figura 15. Expresión de proteíca de eNOS y ARG2p. 94
- Figura 16. Determinación de O2• - en células endoteliales por HPLCp. 95
- Figura 17. Expresión proteíca de PGC1A y Nrf2 por inmunofluorescenciap. 96
- Figura 18. Expresión de lncRNAs relacionados con impriting en placentap. 100
- Figura 19. Esquema del locus DLK1-DIO3 en el cromosoma 14 humanop. 101
- Figura 20. Loci del gen de leptinap. 104
- Figura 21. Concentración de MDA en plasma de sangre de cordón umbilicalp. 107
- Anexo 1. Registro del ensayo clínico en clinical trialsp. 148
- Anexo 2.Acta del comité de ética humanap. 149
- Anexo 3. Consentimiento informado para mayores de edadp. 151
- Anexo 4. Analisis de estabilidad del suplementop. 154
- Anexo 5. Formato de captacion participantesp. 155
- Anexo 6. Formato de valoración ginecológicap. 156
- Anexo 7. Formato de asistencia a las pruebas del estudiop. 157
- Anexo 8. Bloques de aleatorizaciónp. 158
- Anexo 9. Formato de seguimiento consumo del suplementop. 160
- Anexo 10. Formato de registro datos VMFp. 161
- Anexo 13. Imágenes cultivo de las células endotelialesp. 164
- Anexo 14. Mapas génicos de lncRNAs evaluados por RT-PCR en placentap. 165
- angiogenesis y biodisponibilidad del NOp. 167
- umbilical con variables maternas en primer y tercer trimestrep. 168
- Anexo 17.Tabla análisis de las variables morfométricas de la placentap. 169